Циркулирующие в стационарах возбудители внутрибольничных инфекций постепенно формируют так называемые госпитальные штаммы , т. е. штаммы наиболее эффективно адаптированные к местным особенностям того или иного отделения.
Главной особенностью госпитальных штаммов является повышенная вирулентность (во всех случаях это первая и главная особенность госпитального штамма), а также специфическая адаптация к используемым лечебным препаратам (антибиотики, антисептики, дезинфектанты и т. п.). В настоящее время сложилась система, по которой о госпитальном штамме судят по спектру устойчивости к антибиотикам.
Условия, в которых условно-патогенные микроорганизмы способны вызвать заболевание, и особенности госпитальной среды, которые способствуют реализации этих условий
Это удобная и доступная в практических условиях система контроля формирования госпитального штамма возбудителями внутрибольничных инфекций, поскольку имеются неопровержимые данные о связи между используемыми антибиотиками в стационаре и спектром резистентности возбудителей. Но при этом надо иметь в виду, что такие штаммы оказываются чрезвычайно опасными не только из-за устойчивости к лечебным препаратам, но и в связи с их повышенной (причем иногда значительно) вирулентностью (у них меньшая инфицирующая доза, приобретены дополнительные факторы патогенности и т. д.).
Госпитальные штаммы в результате устойчивой циркуляции в лечебном учреждении приобретают дополнительные внутривидовые характеристики, позволяющие эпидемиологам устанавливать эпидемиологические связи между пациентами, определять пути и факторы передачи.
Условно-патогенные микроорганизмы вызывают основную часть внутрибольничных инфекций . В отечественной литературе для обозначения внутрибольничных инфекций, вызываемых УПМ, часто используется термин «гнойно-септические инфекции» (ГСИ), хотя этот термин иногда вызывает недоумение клиницистов (гнойное отделяемое не всегда сопровождает течение инфекции, вызванной УПМ). Причина доминирования условно-патогенных микроорганизмов в этиологической структуре ВБИ заключается в том, что именно в госпитальных условиях условно-патогенные микроорганизмы встречают те самые условия, которые обеспечивают их способность вызывать клинически выраженные заболевания.
Как внутрибольничные или госпитальные инфекции следует рассматривать любые клинически распознаваемые инфекционные заболевания, возникающие у больных после госпитализации либо посещения лечебного учреждения с целью лечения, а также у медицинского персонала в силу осуществляемой им деятельности, независимо от того, проявляются или не проявляются симптомы этого заболевания во время нахождения данных лиц в медицинском учреждении. Инфекция, не находящаяся в стадии инкубации на момент поступления в стационар и развившаяся не раннее, чем через 48 часов после госпитализации.
Причины возникновения, роста и широкого распространения внутрибольничной инфекции
1. Профилактические и лечебные мероприятия с широким применением антибиотиков и других химиотерапевтических средств привели к тому, что были созданы условия для формирования новых внутригоспитальных штаммов, повышения вирулентности условно-патогенных микроорганизмов, приобретения патогенных свойств представителями нормальной микрофлоры.
2. Прогрессивное использование новых технологий в лечении, основанном на инвазивных методах (катетер-ассоциированные инфекции) и внедрение новых высокоспецифичных экспресс-методов лабораторной диагностики , позволяющих увеличить количество положительных результатов. Чаще всего внутрибольничное инфицированное возникает в отделениях реанимации и хирургии, при использовании аппаратуры для гемодиализа, искусственного дыхания, эндоскопических процедур, наркозной аппаратуры, переливания крови. Использование этого пути создает новые входные ворота для проникновения возбудителя, что позволило сформироваться новому искусственному артифициальному механизму передачи инфекции.
3. Сложившиеся в современных условиях тенденции к строительству крупных больничных комплексов, в которых находится большое количество ослабленных и больных пациентов, способствует формированию внутригоспитального инфицирования.
4. Широкое и подчас неоправданное применение антибактериальных средств, приводящее к формированию антибиотикорезистентности (появлению лекарственной устойчивости микроорганизмов).
5. Постоянно происходящая активизация естественных механизмов передачи возбудителя, возникающая в условиях постоянного контакта пациента и медицинского персонала, а также в результате контакта больных между собой.
6. Нарушения нормального биоценоза, который является мощным фактором неспецифической защиты организма. Примером может служить отсутствие грудного вскармливания .
7. Проблемы экологического характера: загрязнение окружающей среды, изменения условий жизни населения, приводящие к снижению резистентности организма и к неполноценной борьбе с возбудителем.
8. Недостаточные требования к соблюдению санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима в лечебно-профилактических учреждениях, что приводит к возникновению новых вспышек заболеваемости. Нарушение принципов асептики: использование нестерильного инструмента.
9. Пользование готовыми лекарственными средствами, которые могут быть загрязнены микроорганизмами .
Микроорганизмы, вызывающие внутрибольничные инфекции.
Наиболее признанным определением понятия «госпитальный» штамм является следующее... «это штаммы микроорганизмов, которые выделяются от больных в стационаре, в процессе циркуляции адаптировались к условиям стационара и характеризуются ярко выраженной резистентностью ко многим антибиотикам (полирезистентны)». Таким образом, «госпитальный» штамм, есть результат селективного действия антибиотиков. Эти штаммы наиболее вирулентны и обладают множественной лекарственной устойчивостью . Это еще раз подтверждает мнение о том, что широкое применение антибиотиков, приводит к формированию порочного круга «успех лечения – селекция устойчивых штаммов – возникновение ВБИ».
Следующие группы ВБИ:
Первая группа: инфекции, вызванные патогенными микроорганизмами. Эта группа включает специфические инфекции, такие как корь, дифтерия, скарлатина, краснуха, паротит. Их доля во внутрибольничной инфекционной патологии составляет не более 15%. Возникновение и распространение этих инфекций связано с попаданием возбудителя в лечебное учреждение или происходит при заражении персонала при работе с инфицированным материалом.
Пути попадания патогенных возбудителей связаны, прежде всего, с поступлением в стационар больных, которые находятся в инкубационном периоде болезни или носителей патогенного возбудителя, или при контакте посетителей больниц в период вспышки, а также через передаваемые пищевые продукты.
Вторая группа: инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами, которые входят в состав нормальной микрофлоры организма . Их называют – оппортунистические инфекции , то есть инфекции, вызванные микробами оппортунистами.
Возбудители ВБИ:
1. Бактерии : Staphylococcus aureus (MRSA); другие стафилококки и микрококки; стрептококки групп А, В, С; энтерококки; анаэробные кокки; клостридии; неспорообразующие грамотрицательные бактерии; энтеробактерии (Salmonella, Shigella ); энтеропатогенные E. сoli, Proteus spp., Klebsiella spp.; Serratia spp.; Acenetobacter spp.; Enterobacter spp.; Pseudomonas aeruginosa; Flavobacterium meningosepticum; Corynebacterium diphtheriae; Listeria spp.; Mycobacterium tuberculosis; Bordetella pertussis; Camphylobacter spp.; Legionella spp.; Mycoplasma spp.; Chlamydia spp.
2. Вирусы: гепатитов, оспы,ветряной оспы, гриппа и других ОРЗ, герпесвирусы, цитомегаловирусы, кори, краснухи, ротавирусы, эпидемического паротита.
3. Грибы: Candida spp., Nocardia spp., Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis,Cryptococcus neoformans, Aspergillu spp. , Pneumocystis spp.
4. Простейшие: Toxoplasma, Cryptosporidium, Enterobius vermicularis, Hymenolepis diminuta.
-- [ Страница 1 ] --
На правах рукописи
ДОЛГИЙ
Алексей Алексеевич
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ГОСПИТАЛЬНЫХ ШТАММОВ В УРОЛОГИЧЕСКИХ ОТДЕЛЕНИЯХ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург - 2013
Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
заслуженный деятель науки РФ,
доктор медицинских наук,
профессор Зуева Людмила Павловна
Официальные оппоненты:
Пелешок Степан Андреевич - доктор медицинских наук, профессор, ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, ведущий научный сотрудник научно-исследовательского центра.
Мукомолов Сергей Леонидович - доктор медицинских наук, профессор, ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», заведующий отделом эпидемиологии.
Ведущая организация : ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Защита состоится 21 июня 2013 г. в 15-00 часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.12 на базе ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ (194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6).
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны РФ.
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук,
профессор Иванов Валерий Владимирович
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования.
Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) наиболее распространены среди инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП), составляя до 40% от общего числа случаев ИСМП. Важность проблемы ИМП обусловлена также высокими уровнями заболеваемости и смертности пациентов, значительными экономическим и социальным ущербами. За последние годы накопилось значительное количество информации о распространении резистентных штаммов уропатогенов, которые выделяются не только в условиях стационара, но и при внебольничных случаях ИМП (Лопаткин Н.А., 2001 г.).
Важнейшей проблемой системы здравоохранения является изучение свойств госпитальных штаммов возбудителей нозокомиальных инфекций и причин их формирования, поскольку появление госпитальных штаммов сопровождается резким снижением эффективности санитарно-противоэпидемических и профилактических мероприятий в стационарах.
В настоящее время с развитием генетики в мире проводится всё больше исследований по выяснению взаимодействий бактерий с бактериофагами. Фаги обнаруживают во всех экосистемах, где существуют бактерии. Выявлена важная роль фагов в переносе генетического материала между бактериями, ограничении численности, передачи элективных факторов устойчивости, эволюции бактерий (Vos M., Philip J., Birkett P.J., Elizabeth B., 2009 г., Wommack E., 2003 г.).
Умеренные фаги способны к горизонтальной передаче генов между микроорганизмами через встраивание профага в их генетический аппарат. При этом фаги взаимодействуют лишь с родственными видами бактерий, а не хаотично. Иногда фаги также вовлечены в передачу мобильных генетических элементов или бактериальной ДНК (трансдукция). Однако эти процессы на данный момент недостаточно изучены.
Способность вызывать заболевания человека у некоторых бактерий (V. cholerae, C. diphtheriae и C. botulinum) обусловлена специфической модификацией генома, производимой одним профагом.
Таким образом, детальное изучение роли бактериофагов в формировании госпитальных штаммов возбудителей ИМП и механизмов формирования госпитальных штаммов возбудителей ИМП представляются важной и актуальной научной проблемой эпидемиологии.
Степень разработанности темы исследования. Впервые понятие госпитального штамма микроба было дано Беляковым В.Д. в 1976 году. Он полагал, что полиантибиотикорезистентность является основным свойством госпитального штамма. В настоящее время наиболее актуальным и общепринятым является понятие госпитального штамма, предложенное Зуевой Л.П. в 2008 году. Согласно данному положению основными свойствами госпитального штамма являются вирулентность и способность вызывать групповые вспышки заболеваемости. В настоящее время происходит эволюционное развитие госпитальных штаммов, возрастает их устойчивость к антибиотикам, дезинфектантам и антисептикам. Часто госпитальные штаммы становятся возбудителями инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. Благодаря последним достижениям науки стало возможным использование молекулярно-генетических исследований для изучения механизмов формирования госпитальных штаммов. В настоящее время осуществляется активное секвенирование штаммов возбудителей ИМП преимущественно зарубежными учёными и изучение генов вирулентности (Brssow H., 2004 г., Barondess J.J., 1995 г., Winstanley C., 2009 г., Toba F.A., 2011 г.). В том числе изучается роль бактериофагов в передаче генов вирулентности у госпитальных штаммов (Yasmin A., 2010 г., Brssow H., 2004 г.). Однако, участие бактериофагов в формировании госпитальных штаммов возбудителей ИМП и влияние генов вирулентности у госпитальных штаммов на проявления эпидемического процесса обусловленных ими инфекционных заболеваний у пациентов урологических стационаров остаются недостаточно изученными.
Цель исследования – выявить эпидемиологические особенности формирования госпитальных штаммов в урологических отделениях под воздействием бактериофагов.
Задачи исследования :
1. Определить этиологическую структуру штаммов микроорганизмов, вызывающих ИМП в урологическом отделении.
2. Выявить частоты внутрибольничных инфекций мочевыводящих путей и заносов инфекций мочевыводящих путей в урологическом отделении.
3. Изучить генетическую структуру штаммов возбудителей ИМП.
4. Выявить инцидентность фаговых генов вирулентности у ведущих возбудителей ИМП.
5. Изучить формирование госпитальных штаммов возбудителей ИМП под влиянием бактериофагов.
6. Разработать меры борьбы с госпитальными штаммами возбудителей ИМП с помощью бактериофагов.
Научная новизна исследования.
Впервые с использованием молекулярно-генетических методов изучен механизм развития эпидемического процесса внутрибольничных инфекций мочевыводящих путей (ВИМП).
Впервые в урологическом отделении определена эпидемиологическая значимость штаммов Enterococcus spp., E. coli, Klebsiella spp., Proteus spp., Pseudomonas spp., имеющих гены фагоопосредованных факторов вирулентности.
Определены эпидемиологические особенности формирования госпитальных штаммов возбудителей ИМП под влиянием бактериофагов.
Разработана тактика применения бактериофагов в урологических стационарах.
Теоретическая и практическая значимость исследования. Теоретическая значимость работы заключается в выявлении эпидемиологических особенностей формирования госпитальных штаммов под воздействием бактериофагов.
Изучены генетические и фенотипические характеристики госпитальных штаммов возбудителей ИМП, циркулирующих в урологических отделениях. Охарактеризована эпидемиологическая значимость штаммов, имеющих гены фагоопосредованных факторов патогенности.
Выявлены главные факторы риска внутрибольничных заражений пациентов урологического отделения.
Изучен механизм развития эпидемического процесса ВИМП с применением молекулярно–генетических методов.
Практическая значимость работы заключается в разработке тактики применения бактериофагов в урологических отделениях. Показана эффективность бактериофагов как лечебных средств для борьбы с госпитальными штаммами возбудителей ИМП in vitro.
Проведена адаптация RAPD-генотипирования с универсальным праймером R5 для типирования уропатогенных энтерококков. Подобраны последовательности праймеров и разработаны методики для поиска фагоопосредованных генов вирулентности у штаммов ведущих возбудителей ИМП.
Методология и методы исследования. В исследовании использовались современные общенаучные и специальные эпидемиологические и лабораторные методы. Проводилась выкопировка данных из историй болезни пациентов и медицинской документации Медико-санитарной части №70 СПБ ГУП «Пассажиравтотранс» (МСЧ №70) и СПб ГБУЗ «Городская Больница №26» (ГБ №26) с последующим занесением данных в специально разработанную форму программы Epi Info. Проводились сбор эпидемиологического анамнеза, проспективное и ретроспективное эпидемиологическое наблюдение. Осуществлялись бактериологическое исследование выделенных от пациентов стационаров штаммов с выявлением профиля устойчивости к антибиотикам, ПЦР RAPD-генотипирование всех выделенных штаммов, ПЦР поиск фагоопосредованных генов вирулентности у изучаемых штаммов по специально разработанным методикам. Значимость всех полученных результатов оценивалась общепринятыми статистическими методами.
Положения, выносимые на защиту:
1. Формирование госпитальных штаммов с наличием фагоопосредованных генов вирулентности приводит к активизации эпидемического процесса инфекций мочевыводящих путей.
2. Наиболее значимыми факторами риска, способствующими возникновению внутрибольничных заражений в урологическом отделении, явились: катетеризация мочевыводящих путей; факторы, ассоциированные с перевязкой пациентов, и проведение цистоскопии.
3. Штаммы возбудителей инфекций мочевыводящих путей, имеющие разные профаговые гены вирулентности, существенно различаются по способности распространяться в госпитальных условиях.
Материалы диссертации доложены и обсуждены:
1. На всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы медицины и биологии», 27 – 30 апреля 2010 года, СПбГМА им. И.И. Мечникова, Санкт – Петербург.
2. На всероссийской конференции «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия», 21 – 22 декабря 2010 года, ФГБУ “НИИЭМ” СЗО РАМН, Санкт – Петербург.
3. На всероссийской конференции с международным участием «III Ежегодная научная конференция молодых ученых и специалистов», 24-25 марта 2011 года, ФГБУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова», Санкт-Петербург.
4. На всероссийской конференции с международным участием «Профилактическая медицина-2011», 24 ноября 2011 года, СЗГМУ им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург.
5. На всероссийской конференции с международным участием «IV Ежегодная научная конференция молодых ученых и специалистов», 22-23 марта 2012 года, ФГБУ «ФЦСКЭ им. В.А. Алмазова», Санкт-Петербург.
6. На региональной конференции «Актуальные вопросы эпидемиологической диагностики, выявления и учёта ВБИ (ИСМП) в соответствии с действующим законодательством и региональными стандартами», 13 июня 2012 года, Комитет по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга, Санкт-Петербург.
8. На всероссийской конференции с международным участием «Профилактическая медицина - 2012», 28 ноября 2012 года, СЗГМУ им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург».
Реализация результатов исследования. Материалы диссертации использованы при выполнении гранта в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг., по лоту «Проведение научных исследований коллективами научно-образовательных центров в области фундаментальной медицины и физиологии» шифр «2010-1.1-143-115»,
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Реферат
Изменение чувствительности госпитальных штаммов к действию дезинфектантов
Введение
Одним из основных направлений деятельности здравоохранения ВОЗ признает создание и укрепление системы повышения безопасности пациентов и улучшение качества медицинской помощи.
Одним из критериев качества оказания медицинской помощи является показатель заболеваемости внутрибольничными инфекциями (ВБИ).
Проблема ВБИ актуальна для здравоохранения всех стран в связи с высоким уровнем заболеваемости и летальности, а также значительным социально-экономическим ущербом, причиняемым ими. Заболеваемость ВБИ в РФ на протяжении последних лет обнаруживает тенденцию к росту.
Причинами роста заболеваемости являются:
Создание крупных больничных комплексов, где концентрируется большое число ослабленных лиц;
Увеличение числа инвазивных диагностических и лечебных процедур;
Использование сложного медицинского оборудования, стерилизация которого сопряжена с большими трудностями;
Формирование госпитальных штаммов, обладающих устойчивостью к лекарственным препаратам и дезинфектантам;
Увеличение в популяции групп повышенного риска: недоношенных детей, больных хроническими заболеваниями;
Демографические сдвиги в обществе (увеличение удельного веса лиц старших возрастных групп);
Снижение неспецифических защитных сил организма в связи с неблагоприятными экологическими условиями.
Актуальность проблемы внутрибольничных инфекций обусловлена появлением так называемых госпитальных (как правило, полирезистентных к антибиотикам и химиопре-паратам) штаммов стафилококков, сальмонелл, синегнойной палочки и других возбуди-телей. Они легко распространяются среди детей и ослабленных, особенно пожилых, больных со сниженной иммунологической реактивностью, которые представляют собой так называемую группу риска.
Заболеваемость госпитальными инфекциями колеблется от 5 до 20% от общего числа пациентов, госпитализированных в лечебные учреждения. По результатам ряда исследований, уровень смертности в группе госпитализированных и приобретших внутрибольничные инфекции пациентов в 8-10 раз превышает таковой среди госпитализированных больных без внутрибольничных инфекций.
Возбудители госпитальных инфекций отличаются высоким персистентным потенциалом и быстро развивающейся устойчивостью к дезинфектантам и антибиотикам, что позволяет патогенной микрофлоре длительное время находиться в окружающей среде и противостоять защитным силам макроорганизма.
В настоящее время в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) используются дезинфицирующие средства (ДС), относящиеся к различным химическим классам:
Галогенопроизводные (в т. ч. хлорсодержащие);
Поверхностно-активные вещества (ПАВ), в т. ч. четвертичные аммониевые соедине-ния (ЧАС);
Гуанидины;
Спирты и т.д.
Характеристики, на основе которых выбирают эффективное дезинфицирующее сред-ство, включают в себя прежде всего спектр антимикробной активности.
Наличие устойчивости микроорганизмов, циркулирующих в медицинских организа-циях (МО), к дезинфицирующим средствам и необходимость динамического наблюдения за устойчивостью микроорганизмов к дезинфектантам обоснована в работах ряда отече-ственных и зарубежных авторов (Mc Donnel G., Russel A.D., 1999, 2003; White D.G, 2001, Cloete T.E., 2003, Wenzel R, 2004, Chapman J.S. 2004, Красильников А.А, Гудкова Е.И., 1996-2009, Акимкин В.Г., 2006, Пантелеева Л.Г., 2006; Селькова Е.П. с соавт., 2006, Scientific Committee on Emerging and Newly Identified Health Risks - SCENIHR, 2009, Сер-гевнин В.И. с соавт., 2010).
1 . Ти пы устойчивости бактерий к антибиотикам
микроорганизм бактерия госпитальный штамм
Механизмы резистентности могут быть подразделены на первичные и приобретенные.
К первичным механизмам относятся те, которые связаны с отсутствием «мишени» для действия данного препарата; к приобретенным - изменением «мишени» в результате модификаций, мутаций, рекомбинаций. В первом случае речь идет о естественной (видовой) резистентности, например у микоплазм к пенициллину из-за отсутствия у них клеточной стенки. Однако чаще всего резистентность к химиотерапевтическим препаратам, в том числе антибиотикам, приобретается микробными клетками с генами резистентности (г-гены), которые они получают в процессе своей жизнедеятельности от других клеток данной или соседней популяции. При этом наиболее эффективно и с высокой частотой r-гены передаются плазмидами и транспозонами (см. 6.2). Один транспозон передает резистентность только к одному препарату. Плазмиды могут нести несколько транспозонов, контролирующих резистентность к разным химиотерапевтическим препаратам, в результате чего формируется множественная резистентность бактерий к различным препаратам.
Устойчивость к антибиотикам бактерий, грибов и простейших также возникает в результате мутаций в хромосомных генах, контролирующих образование структурных и химических компонентов клетки, являющихся «мишенью» для действия препарата. Так, например, резистентность дрожжеподобных грибов родаCandida к нистатину и леворину может быть связана с мутационными изменениями цитоплазматическои мембраны.
Биохимические механизмы резистентности бактерий к бета-лактамным антибиотикам разнообразны. Они могут быть связаны с индуцибельным синтезом бета-лактамазы, изменениями в пенициллиносвязывающих белках и других «мишенях». Описано около 10 пенициллиносвязывающих белков - ферментов, участвующих в синтезе бактериальной клеточной стенки. Кроме того, резистентность к ампициллину и карбенициллину можно объяснить снижением проницаемости наружной мембраны грамотрицательных бактерий. Развитие того или другого типа резистентности определяется химической структурой антибиотика и свойствами бактерий. У одного и того же вида бактерий могут существовать несколько механизмов резистентности.
Механизм быстрого развития резистентности к новым цефалоспоринам, устойчивым к действию цефалоспориназ, зависит от образования комплекса антибиотика с индуцибельными латамазами, При этом гидролиза антибиотика не происходит. Такой механизм обнаружен у протеев.
Биохимические механизмы приобретенной резистентности к аминогликозидным антибиотикам и левомицетину связаны со способностью бактерий образовывать ферменты (ацетилтрансферазу, аденилтрансферазу, фосфотрансферазу), которые вызывают соответственно ацетилирование, аденилирование или фосфорилирование данных антибиотиков. Устойчивость к тетрациклину обусловлена главным образом специфическим подавлением транспорта данного антибиотика в бактериальные клетки и т.д.
Таким образом, происходит образование отдельных резистентных особей в бактериальной популяции. Их количество крайне незначительно. Так, одна мутировавшая клетка (спонтанная мутация), устойчивая к какому-либо химиотерапевтическому препарату, приходится на 105-109 интактных (чувствительных) клеток. Передача г-генов с плазмидами и транспозонами повышает число резистентных особей в популяции на несколько порядков. Однако общее число лекарственно-резистентных бактерий в популяции остается весьма низким.
Формирование лекарственно-устойчивых бактериальных популяций происходит путем селекции. При этом в качестве селективного фактора выступает только соответствующий химиотерапевтический препарат, селективное действие которого состоит в подавлении размножения огромного большинства чувствительных к нему бактерий.
Массовой селекции и распространению антибиотикорезистентных бактериальных популяций способствуют многие факторы. Например, бесконтрольное и нерациональное применение антибиотиков для лечения и особенно для профилактики различных инфекционных заболеваний без достаточных к тому оснований, а также использование пищевых продуктов (мясо домашних птиц и др.), содержащих антибиотики (тетрациклин), и другие факторы.
В зависимости от скорости возникновения мутантов приобретенная вторичная устойчивость бывает два типов: стрептомициного и пеницилинового.
Стрептомициновий тип возникает как « одноступенчатая мутация », когда быстро происходит образование мутантов с высокой устойчивостью после одно-двукратного контакта микроба с антибиотиком. Степень ее не зависит от концентрации препарата (стрептомицина, рифампицина, новобиоцина).
Пенициллиновий тип резистентности формируется постепенно, путем « многоступенчатых мутаций». Селекция стойких вариантов при этом происходит медленно (пеницилин, ванкомицин, левомицетин, полимиксин, циклосерин)
Резистентность микробов к антибиотикам обеспечивается генами, которые локализуются или в хромосоме, или в составе внехромосомних элементов наследственности (транспозоны, плазмиды).
Хромосомные мутации -самая частая причина изменения рецептора, мишени, с которой взаимодействуют лекарства. Так, белок Р10 на 30s субъединице бактериальной рибосомы является рецептором для прикрепления стрептомицина. У бактерий, устойчивых к действию эритромицина, может повреждаться сайт на50s субединице рибосомы в результате метилирования 23s рРНК.
R-плазмиды могут содержать от одного до десяти и больше разных генов лекарственной резистентности, которая делает микроба нечувствительным к подавляющему большинству антиибиотикив, которые используются в клинике. Некоторые из них (конъюгативные, трансмиссивные) способны передаваться от одного бактериального штамма к другому не только в пределах одного вида, но и часто разных видов и даже родов микробов. Кроме конъюгации возможна передача детерминант устойчивости с помощью трансдукции (у стафилококков), а также трансформации.
2. Определение чувствительности бактерий к дезинфектантам
Оценка чувствительности микробов к дезинфектантам и изучению их фармакокинетики в организме больного является основными лабораторными показателями, которые при их сопоставлении позволяют прогнозировать эффективность антибактериальной терапии. Кроме того, результаты определения антибиотикочувствительности используют в качестве маркера, что позволяет обнаруживать и контролировать изменения антибиотикограммы возбудителей в динамике, использовать детерминанты резистентности, которые чаще всего встречаются, или их комбинации как дополнительные маркеры при диагностике внутрибольничных инфекций, для выявления источников инфицирования и путей распространения полирезистентних штаммов. Такие данные, полученные и обобщенные в разных регионах страны в течение фиксированных промежутков времени, используются при формировании политики антибактериальной терапии и определении номенклатуры антибиотиков, которые выпускаются в стране.
Наиболее распространенными методами определения антибиотикочувствительности возбудителей инфекций является диско-дифузионный (метод дисков) и серийных разведений.
Питательные среды для определения чувствительности бактерий к антибиотикам должны отвечать таким требованиям:
* быть стандартными и обеспечивать оптимальные условия роста микроорганизмов;
* не иметь веществ, которые подавляют активность препаратов.
На результаты исследование может существенно влиять значение рН среды. Целесообразнее всего выбирать нейтральное или слабо щелочную среду (рН 7,0 -7 ,4), поскольку эти значения пригодны для большинства антибиотиков. При определении чувствительности бактерий используют бульйон и 1,5-2% агар на перевареХоттингера, обычный мясо-пептонний бульйон и 1,5-2% агар на нем, среда АГВ (агар Гивенталя-Ведьминой), агар Mueller-Hinton 2. Они пригодны при определенииантибиотикочутливости стафилококков, энтеробактерий, псевдомонад. Однако стрептококки и гемофильные бактерии требуют добавки ростовых факторов; дрожжи и анаэробные бактерии - специальных сред и определенных условий культивирования. На результаты определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам-аминогликозидам, полимиксинам, тетрациклинам влияет содержание в питательных средах катионов кальция, магния, что особенно важно при исследовании P. aeruginosa. Оптимальное содержание - 50 мг/л Са2+ и 25 мг/л Mg2+. Большинство сред, которые выпускаются странами СНГ, за этим показателем, как правило, не стандартизируются. Это приводит к существенным колебаниям содержания двувалентных катионов в разных сериях сред, даже если они выпускаются одним предприятием, и искажает результаты.
Ш Диско-диффузионный метод опр еделения антибиотикочувствительн ости является самым простым качественным методом и широко используется для эпидемиологического контроля резистентности. Достоверность результатов обеспечивается путем стандартизации проведения теста на всех этапах исследования: выбор и изготовление питательных сред с учетом всех свойств возможных возбудителей, взятия проб и условия их доставки, изготовления и разливания посевного материала на поверхность агара, выбор дисков (использование набора дисков в соответствии с видом выделенного возбудителя и локализацией инфекции).
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам следует определять только в чистой культуре. Однако в ряде случаев для быстрого получения ориентировочных данных об антибиотикограмме бактерий используют непосредственно патологический материал. Плотные субстраты (мокрота, гной, кал и др.) растирают, жидкости (моча, экссудаты и др.) центрифугируют, а для посева используют осадок. Исследуемый материал наносят на поверхность питательной среды петлей или ватным тампоном. После получения чистой культуры исследования повторяют.
Для изготовления инокулюма 5-10 однородных колоний суспендируют в 2 мл жидкой среды или физраствора. Бактериальную суспензию (103-105 колониеобразующих единиц в 1 мл в зависимости от вида микробов) в объеме 1 мл равномерно распределяют по поверхности среды при покачивании чашки, избыток жидкости удаляют пипеткой. Чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 20-30 мин, а затем на них на одинаковом расстоянии кладут диски с антибиотиками.
Равномерность газона, которая определяется величиной посевной дозы, - самый главный фактор получения достоверных результатов и подлежит количественной оценке и качественной стандартизации. Степень нестандартности результатов исследования, который связан с изменением величины дозы инокулюма, варьирует в зависимости от вида возбудителей, свойств антибиотика и других факторов. При небольшой дозе инокулюма при определении чувствительности к бета-лактамнихпрепаратам пеницилиназо-образующих бактерий можно получить большие размеры зон задержки роста, которые создают представление о высокой чувствительности штаммов. И, напротив, размер зон резко снижается при увеличении плотности инокулюма. Решающее значение имеет его величина при определении чувствительности к беталактамным антибиотикам метицилинорезистентних вариантов стафилококков в результате гетерогенности их именно за показателем чувствительности. Для выявления стойкости к метицилину необходимо придерживаться определенных температурных режимов (30-35°С). Поскольку эти стафилококки медленнее растут при 37°С, следует их культивировать на средах с добавлением 5% хлорида натрия. Результаты учитывают через 24 и 48 год. Для контроля стандартности проведения исследований в каждом опыте используют тестовые культуры с известной чувствительностью к антибиотикам. ВООЗрекомендует три штамма типичных культур: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. При определении антибиотикочутливости выделенных штаммов следует сопоставлять полученные данные с размерами зон угнетения роста вокруг дисков с антибиотиками для контрольных культур. Их сравнивают с допустимыми контрольными значениями.
Если диаметры зон угнетения роста контрольных штаммов находятся в определенных границах, это свидетельствует о достаточной стандартизации и точности проведенных экспериментов. Не следует размещать на чашке Петри свыше 6 дисков, так как при больших диаметрах зон задержки роста это может быть источником ошибок и влиять на количественную интерпретацию результатов. Правильный подбор набора дисков является фактором, который определяет корректность исследований и, без сомнения, интерпретацию результатов. Ориентировочные данные относительно выбора наборов дисков с учетом вида выделенного возбудителя и локализации инфекции приведены в таблице.
Оценку результатов проводят за таблицей, которая содержит предельные значения диаметров зон задержки роста для резистентных, умеренно резистентных и чувствительных штаммов, а также значения минимальной подавляющей (ингибирующей) концентрации (МПК, МИК) антибиотиков для стойких и чувствительных штаммов.
Полученные значения диаметров зон задержки роста сравнивают с контрольными значениями таблицы и относят исследуемые штаммы к одной из трех категорий чувствительности.
Ш Метод диффузии с помощью дисков является качественным методом. Он позволяет установить лишь факт чувствительности или резистентности возбудителей инфекции. Однако установлена коррелятивная связь размеров зон угнетения роста исследуемых штаммов и значений МИК (минимальная концентрация препарата, которая ингибирует рост исследуемого штамма) антибиотиков позволяет оценить степень чувствительности и количественно, используя данные, приведенные в специальных таблицах. За своей степенью чувствительности к антибиотикам микроорганизмы разделяются на три группы:
1 группа - чувствительные к антибиотикам (возбудители уничтожаются в организме при использовании обычных терапевтических доз препаратов);
2 группа - умеренно резистентные (для них лечебный эффект может быть достигнут при использовании максимальных терапевтических доз препаратов);
3 группа - резистентные (бактерицидных концентраций препаратов в организме создать невозможно, потому что они будут токсичными).
3. Понятие о госпитальных штаммах
Циркулирующие в стационарах возбудители внутрибольничных инфекций постепенно формируют так называемые госпитальные штаммы, т.е. штаммы наиболее эффективно адаптированные к местным особенностям того или иного отделения.
Госпитальные штаммы в результате устойчивой циркуляции в лечебном учреждении приобретают дополнительные внутривидовые характеристики, позволяющие эпидемиологам устанавливать эпидемиологические связи между пациентами, определять пути и факторы передачи.
Условно-патогенные микроорганизмы вызывают основную часть внутрибольничных инфекций. В отечественной литературе для обозначения внутрибольничных инфекций, вызываемых УПМ, часто используется термин «гнойно-септические инфекции» (ГСИ), хотя этот термин иногда вызывает недоумение клиницистов (гнойное отделяемое не всегда сопровождает течение инфекции, вызванной УПМ). Причина доминирования условно-патогенных микроорганизмов в этиологической структуре ВБИ заключается в том, что именно в госпитальных условиях условно-патогенные микроорганизмы встречают те самые условия, которые обеспечивают их способность вызывать клинически выраженные заболевания.
4. Мониторинг устойчивости бакте рий к дезинфицирующим средствам
Мониторинг устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам (МУ к ДС) представляет собой динамическую оценку состояния чувствительности патогенных и условно-патогенных бактерий, выделенных в медицинских организациях (МО) от пациентов, персонала и из различных объектов внешней среды, к дезинфицирующим средствам.
С 2010 года мониторинг устойчивости микроорганизмов к ДС закреплен в нормативных документах. В СанПиНе 2.1.3.2630 - 10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность» в п. 6.2 указано: «В целях предупреждения возможного формирования резистентных к дезинфектантам штаммов микроорганизмов следует проводить мониторинг устойчивости госпитальных штаммов к применяемым дезинфицирующим средствам с последующей их ротацией при необходимости».
МУ к ДС проводится во всех МО (многопрофильных и специализированных стационарах (B), амбулаторно-поликлинических МО (C), диспансерах, учреждениях охраны материнства и детства (УОМД) (B) и пр.) в рамках эпидемиологического надзора в соответствии с определенными параметрами, составляющими тактику МУ к ДС. Тактика МУ к ДС включает общие и специальные параметры. К общим параметрам относятся типы, режимы, объем мероприятий, характер проведения, тестируемые ДС, объекты и методы исследования; к специальным - особенности организации, проведения, анализа и оценки результатов МУ к ДС в МО различного профиля и на территориальном уровне в зависимости от эпидемиологической обстановки.
Тип МУ к ДС
Состояние чувствительности микрофлоры МО к ДС может оцениваться по результатам тотального (сплошного), направленного и комбинированного мониторинга (рис.).
микроорганизм бактерия госпитальный штамм
Режим МУ к ДС
Режим мониторинга выбирается в зависимости от эпидемиологической ситуации в МО, ее профиля и структуры, характеристик микробного пейзажа и особенностей дезинфекционного режима (спектр и объем применяемых ДС, масштабы и длительность их использования, действующие вещества ДС и т.д.) и может быть:
периодический - рекомендуется для всех МО при эпидемиологическом благополучии (в среднем, 1 раз в квартал). Периодический мониторинг, проводимый в плановом порядке, позволяет своевременно обнаружить наличие устойчивых к ДС вариантов бактерий, отследить тенденции изменения чувствительности микрофлоры, выявить смену состояния чувствительности микрофлоры МО к ДС (В, GPP);
усиленный - проводится по показаниям (1 раз в месяц или чаще). Необходимость усиления мониторинга может быть продиктована распространением в МО или в отдельных её подразделениях устойчивых к ДС вариантов возбудителей; появлением предвестников осложнения или ухудшением эпидемиологической обстановки; сменой стадии чувствительности микрофлоры МО к ДС; появлением информации о неэффективности используемого ДС, переход на другие ДС. Перечень показаний к усилению МУ к ДС определяется эпидемиологом МО (комиссией по профилактике ИСМП) (В, GPP);
постоянный - в отделениях и МО высокого риска, где наблюдается распространенность устойчивости к ДС и стабильное обнаружение резистентных штаммов; оптимальным следует считать рутинное исследование микроорганизмов на чувствительность к ДС при их выделении наряду с оценкой антибиотикорезистентности на постоянной основе (В, GPP).
Характер проведения МУ к ДС
Характер проведения мониторинга определяется эпидемиологической обстановкой в МО и на территории в целом и может проводиться:
по эпидемическим показаниям.
В соответствии с СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно - эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность» МУ к ДС должен носить плановый характер и быть внедрен в каждой МО.
Объем мероприятий по МУ к ДС
Объем мероприятий по мониторингу определяется эпидемиологом МО и зависит:
от состояния чувствительности микрофлоры МО к ДС;
от профиля МО;
от особенностей микробного пейзажа;
от эпидемиологической ситуации в МО;
от характеристик дезинфекционного режима;
Объем исследований в МО должен быть не менее, чем 100 культур в год (25 культур ежеквартально). Это тот минимум, который необходим для оценки состояния чувствительности микрофлоры МО к ДС. Распространенность устойчивости к ДС в МО составляет 1,1-5,8 на 100 исследований, что свидетельствует о необходимости обеспечения определенного объема исследований наряду с правильным отбором культур для выявления устойчивых штаммов (C, GPP).
Тестируемые ДС
ДС разных групп химических соединений, применяемые в МО;
ДС разных групп химических соединений, планируемые к применению в МО;
ДС с разными действующими веществами в пределах одной группы химических соединений;
ДС разными ДВ для ротации.
ДС тестируются в тех режимах (концентрация, экспозиция), в которых они применяются в конкретной МО. При выборе метода исследования и оценке результатов учитывается целевое применение ДС в данной МО - для обработки поверхностей, для дезинфекции изделий медицинского назначения и др.
Проведение проб на чувствительность к антибиотикам и дезинфектантам возможно после учета факторов, которые влияют на возникновение устойчивости.
Факторы, которые влияют на устойчивость к дезинфектантам:
· заниженные концентрации растворов при профилактической дезинфекции;
· неоптимальный выбор дезсредств;
· неправильно проведенная процедура при изменении состава средства;
· неоправданное использование средств бытовой химии. При этом часто используют средства бытовой химии, непрофессиональной, то есть те средства, которые используются в домашних условиях.
Объекты МУ к ДС
Объектами мониторинга являются культуры патогенных и условно - патогенных микроорганизмов, выделенные от пациентов, медицинского персонала и из объектов внешней среды МО. Исследованию подлежат культуры микроорганизмов, выделенные от следующих категорий пациентов:
пациенты с ИСМП - это наиболее значимые объекты исследования при организации мониторинга, они должны составлять его основу и доминировать в структуре источников выделения исследуемых культур;
пациенты с внутрибольничным инфицированием (носители) (A);
пациенты с инфекциями, являющимися заносами в МО;
пациенты групп высокого риска инфицирования ИСМП.
Исследованию подлежат культуры микроорганизмов, выделенные от следующих категорий медицинского персонала (B):
медицинский персонал с инфекцией (ИСМП и заносы);
носители возбудителей инфекций.
Исследованию подлежат культуры микроорганизмов, выделенные из внешней среды (C), а именно:
выделенные из эпидемиологически значимых объектов внешней среды - наиболее вероятных факторов передачи и источников возбудителей инфекции (растворы, оборудование, инструментарий, предметы ухода и др.);
выделенные при проведении процедур риска;
выделенные при рутинном исследовании внешней среды в рамках производственного контроля.
Важными объектами исследования являются также следующие штаммы микроорганизмов, имеющие значение с эпидемиологической точки зрения (B):
штаммы, обусловившие групповые случаи инфекций и вспышки в МО;
госпитальные штаммы, госпитальные микробные ассоциации;
штаммы, лидирующие в этиологической структуре инфекций;
штаммы, лидирующие в микробном пейзаже внешней среды МО; «проблемные» микроорганизмы - микроорганизмы, интенсивность циркуляции которых возросла по сравнению с предыдущим периодом; микроорганизмы с определенным фено- и генотипом резистентности (MRSA, MRSE. VRE);
штаммы микроорганизмов с идентичными характеристиками (резистенс-типы, фаготипы, биовары и др.);
определенные виды микроорганизмов, например, коагулазоотрицательные стафилококки (КОС), Pseudomonas aeruginosa и др.
Данные локального микробиологического мониторинга используют для принятия решения о месте и выборе объекта, проведения дополнительных профилактических мероприятий.
По результатам мониторинга устойчивости к дезсредствам корректируют дезинфекционный режим в целом, в стационаре.
5. Минимальный объем исследований внутрибольничной среды
|
Объект исследования |
Определяемые показатели |
Объем исследований |
Нормативные документы |
|
|
Воздух помещений, в том числе: |
Оценка бактериальной обсемененности |
2 раза в год |
СанПиН 2.1.3.2630-10 МУК 4.2.2942-11 |
|
|
Класс чистоты А |
каждое помещение- 3-5 точек отбора |
|||
|
Класс чистоты Б |
выбор помещений по графику 1-3 точки отбора |
|||
|
Поверхности помещений, мебели, аппаратуры, в том числе: |
Контроль качества дезинфекции |
2 раза в год, выбор помещений по графику |
СП 1.3.2322-08 МУК 4.2.2942-11 |
|
|
Хирургические и акушерские |
40-60 смывов |
|||
|
Инфекционные |
20-40 смывов |
|||
|
Терапевтические, стоматологические, поликлиники, КДЛ, аптека |
10-20 смывов |
|||
|
ИМН, шланги аппаратов ИВЛ, наркозно-дыхательной аппаратуры, гемодиализа, приспособления к кувезам, предметы ухода за больными |
Качество ДВУ |
2 раза в год, 1% от одновременно обработанных изделий одного наименования, но не менее 3 - 5 единиц |
СанПиН 2.1.3.2630-10, приложение 20 МУК 4.2.2942-11 |
|
|
Эндоскопы для нестерильных вмешательств |
Ежеквартально, каждый эндоскоп |
СанПиН 2.1.3.2630-10, приложение 20 СП 3.1.3263-15 МУК 4.2.2942-11 |
||
|
Качество стерилизации |
1 раз в квартал не менее 3 проб |
СанПиН 2.1.3.2630-10, приложение 20 МУК 4.2.2942-11 МУ от 28.02. 1991 №15/6-5 |
||
|
при наличии собственной прачечной |
Качество стирки белья |
2 раза в год, 10 - 15 смывов |
СанПиН 2.1.3.2630-10 |
|
|
Руки и спецодежда медицинского персонала оперблоков, ОРИТ и других |
Оценка бактериальной контаминации |
по эпидпоказаниям и в рамках микробиологического мониторинга |
МУК 4.2.734-99 |
6. Чувствительность к антибиотикам разных групп микроорганизмов
ВОЗ озвучены данные по чувствительности основных групп возбудителей, устойчивых к медикаментам и представляющих наибольшую угрозу для развития инфекций в медучреждении.
На рисунке отражены основные виды возбудителей, категории приоритетности этих возбудителей и устойчивость к тем антибиотикам, которую они выработали.
То есть выделено три уровня - критический уровень, высокий и средний уровень. Стрептококки А и Б и хламидии характеризуются более низким уровнем устойчивости, и в настоящее время не представляет серьезной угрозы.
Центр по контролю и профилактике заболеваний США объявил о выявлении у пациентов с инфекционным заболеванием мочевыводящих путей бактериального загрязнения кишечной палочкой с лекарственной устойчивостью к анистину. У бактерии обнаружены плазмиды, то есть группы кольцевой ДНК, которые и формируют эту устойчивость.
То есть знание тех основных видов возбудителей дает тоже преимущественное значение для медработников и медучреждений при определении своих госпитальных штаммов и ориентируют их на тот круг возбудителей, который на сегодня нашел широкое распространение и применение.
По риску формирования госпитальных инфекций кластеры потенциальных возбудителей подразделены на три кластера и по потенциалу они также разделены на высокий, средний и низкий уровень.
1. Высоким потенциалом обладают такие возбудители, как сальмонеллы, синегнойная палочка, энтерококки, имеются случаи также клостридиальной инфекции.
2. На втором уровне кластера - это средний уровень, преобладают стафилококки и клебсиеллы. Чувствительность стрептококков к антибиотикам наиболее высока.
3. На низком уровне находятся сальмонеллы.
7. Особенности внутрибольничных штаммов Staphylococcus Aureus
Основными возбудителями бактериальных инфекций являются стафилококки, пневмококки, грамотрицательные энтеробактерии, псевдомонады и представители строгих анаэробов. Главенствующую роль играют стафилококки (до 60% всех случаев внутри-больничных инфекций), грамотрицательные бактерии, респираторные вирусы и грибы рода Candida. Штаммы бактерий, выделенные от пациентов с нозокомиальными инфекциями, как правило, более вирулентны и обладают множественной химиорезистентностью.
При исследовании смывов в лечебном учреждении в 35% случаев были выделены штаммы Staphylococcus аureus, в 17% проб были выделены штаммы Klebsiella pneumoniae, в 10% - Proteus vulgaris и Proteus mirabilis, в 2-5% - Enterobacter, Acinetobacter. Так как наиболее часто встречаемыми штаммами являлись штаммы Staphylococcus aureus, были исследованы характеристики золотистого стафилококка.
В качестве факторов персистенции исследовали антилизоцимную (АЛА), антиинтер-фероновую (АИА), антикомплементарную (АКА) активности как возможные пути противостояния кислороднезависимому механизму фагоцитоза и активность антиоксидантного бактериального фермента - каталазы. Антилизоцимной активностью обладало 67% (20 культур) из 30 изученных штаммов. АИА обладало 44% (13 культур), АКА обладали 34% (10 культур) изученных нами штаммов S.aureus.
Известно, что первичными бактерицидными факторами, выделяемыми фагоцитами, являются перекись водорода и продукты ее свободнорадикального разложения, такие как гипохлорид и гидроксильный радикал. Стафилококки приспосабливаются выживать в среде с повышенной концентрацией перекиси водорода путем индукции генов раннего ответа на окислительное повреждение. Белковыми продуктами этих генов являются, среди прочих, фермент каталаза, разлагающий перекись водорода до нейтральных продуктов - воды и молекулярного кислорода и фермент супероксиддисмутаза, разлагающий супе-роксид анион радикал до молекулярного кислорода. Каталазная активность была выявлена у 80% штаммов, при количественной оценке каталазной активности бактерий обнаружено, что большая часть штаммов (55%) обладала высокой активностью фермента (4,0-5,1 ед./20 млн).
35-42% штаммов S. aureus обладали множественной резистентностью, проявляя при этом чувствительность к препаратам цефалоспоринов (цефтриаксон, цефотаксим, цефуроксим). Для исследования чувствительности к применяемым в лечебных учреждениях дезинфектантам была проведена серия опытов по определению чувствительности S. aureus к раствору анолита. Обнаружено, что выделенные штаммы проявили устойчивость более чем в 60% случаев к 0,01% раствору анолита.
Таким образом, при изучении основных особенностей внутрибольничных инфекций, включая персистентный потенциал, антибиотикорезистентность и чувствительность госпитальных штаммов к дезинфектантам можно сделать следующие выводы:
1. При дальнейшем подборе дезинфектантов в стационарах необходимо учесть, что выделенные штаммы проявили устойчивость к 0,01% раствору анолита, применяемого в современных медицинских учреждениях для дезинфекции. Возможно, данный дезинфицирующий раствор необходимо применять в более высокой концентрации или заменить его другим раствором.
2. Высокий персистентный потенциал выделенных штаммов стафилококков является фактором риска для пациентов, приводя к развитию затяжных гнойно-воспалительных заболеваний. Поэтому изучение патогенетически значимых свойств микроорганизмов, направленных на инактивацию эффекторов противоинфекционого иммунитета и тем самым нарушающих процесс элиминации патогена из очага воспаления, может стать альтернативным подходом к прогнозированию длительности течения гнойно-воспалительных заболеваний и дает возможность своевременного подключения иммунокорригирующих препаратов.
В качестве наглядного материала для понимания изменения чувствительности госпитальных штаммов к действию дезинфектантов предлагается использовать данные научной работы:
При изучении чувствительности штаммов S. aureus, выделенных из эпидемически значимых объектов внутренней среды лечебных учреждений, к действию современных дезинфектантов установлено, что наибольшей активностью обладали хлорсодержащие средства (0,02% раствор Анолита и 0,2% раствор Дезактина), а также средство на основе надуксусной кислоты (1,75% раствор Солиокса), бактерицидное действие которых на исследуемые штаммы наблюдалось при экспозиции 5 минут. Резистентность стафилококков, выделенных из всех эпидемически значимых объектов стационаров, наблюдалась к 0,03% раствору Неохлор tabs.
Данные исследования имеют важное практическое значение для своевременной ротации дезинфекционного препарата, обеспечивая эффективную профилактику внутрибольничных инфекций.
Заключение
Несмотря на поиск и внедрение новых методов борьбы с госпитальными микробами, проблема внутрибольничных инфекций остается одной из самых острых в современных условиях, приобретая все большую медицинскую и социальную значимость.
Чувствительность микрофлоры к применяемым ДС в настоящее время может рассматриваться как один из основных факторов, влияющих на качество дезинфекционных мероприятий в лечебно-профилактических учреждениях. Чувствительность различных микроорганизмов к ДС может варьировать в зависимости от типа ЛПУ, особенностей санитарно-противоэпидемического режима, политики применения ДС.
В многолетних исследованиях, проведенных разными авторами, показана необходимость динамической оценки состояния чувствительности микрофлоры ЛПУ к дезинфекционным средствам, т.к. способность микроорганизмов адаптироваться к воздействию неблагоприятных факторов, в том числе применяемых в лечебных учреждениях дезинфицирующих средств, обусловливает возможность формирования устойчивых штаммов.
В связи с этим организация контроля (оценки) чувствительности / резистентности госпитальной микрофлоры к дезинфектантам должна быть составной частью общего микро-биологического мониторинга, функционирующего в рамках системы инфекционного контроля, а также быть одной из составных частей эпидемиологического наблюдения.
Список литературы
1. «МОНИТОРИНГ УСТОЙЧИВОСТИ БАКТЕРИЙ К ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИМ СРЕД-СТВАМ В МЕДИЦИНСКИХ ОРГАНИЗАЦИЯХ» Федеральные клинические рекомендации, 2013 г.
2. Благонравова А.С., Ковалишена О.В. Проблемные вопросы мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам // Медицинский альманах. - 2013
3. Е.В. Анганова, Н.Ф. Крюкова. УСТОЙЧИВОСТЬ К ДЕЗИНФЕКТАНТАМ МИКРО-ОРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ ХИРУРГИЧЕСКОГО СТА-ЦИОНАРА // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 2016, Том 1, №3 (109), Часть I Микробиология и вирусология.
4. Микробиологический контроль в ЛПУ: зоны риска
Госпитальный Штамм Возбудителя - Понятие о госпитальном штамме было сформулировано применительно к стафилокковой госпитальной инфекции на основе эпидемиологических и клинических наблюдений в сопоставлении с результатами микробиологических исследований.
Для изучения этого вопроса нами в течение 1967 - 1968 гг. обследовались больные хирургической клиники на стафилококковое носительство в первые сутки после поступления, накануне дня операции, через 48 ч после оперативного вмешательства и при выписке.
Всего находилось под наблюдением 411 больных. В их число входили пациенты торакального отделения, а также те больные общехирургического профиля, которые оперировались в операционных торакального отделения. Часть больных (72 человека) были выписаны после клинического обследования без оперативного лечения.
Всего было произведено 1116 посевов, из которых выделено 404 культуры патогенного стафилококка.
Из числа типироваиных штаммов среди больных циркулировали патогенные стафилококки I, II, III фагогрупп и смешанных фаготипов. Были выделены культуры стафилококков 81 фаготипа и 1 раз - 187. Удельный вес штаммов, относящихся к различным фагогруппам в отдельные периоды пребывания больных в клинике, был неодинаков. Так, если при поступлении количество штаммов патогенного стафилококка, принадлежащих к I фагогруппе, было 1,5% (т= ± 0,86), то при последнем обследовании перед выпиской 4,78% (т= ± 1,30). Также несколько увеличилось относительное количество штаммов, принадлежащих к III фагогруппе. Это увеличение удельного веса стафилококков I и III фагогрупп произошло за счет уменьшения стафилококков II фагогруппы (с 6% ± 1,68 при поступлении до 3,68 ± 1,14 - при выписке).
Выявлено также отчетливое увеличение количества резистентных к антибиотикам штаммов патогенных стафилококков, выделенных от больных в различные периоды пребывания их в клинике. Особо важным является то обстоятельство, что во время пребывания в клинике у больных стали выделяться полирезистентные штаммы. Постепенное приобретение больными полирезистентных штаммов показано на рис. 2 в сопоставлении с аналогичными данными Bruun (1970).
Все это позволяет сделать вывод о постепенной смене собственных штаммов патогенных стафилококков больных, с которыми они прибыли в клинику, на «госпитальные штаммы », устойчивые к некоторым антибиотикам, принадлежащие к I и III фагогруппам.
Из 102 культур, приобретенных больными во время пребывания в клинике, был определен фаготип у 49 (48%). Только 4 из них относились ко II фагогруппе (3,9%) и 1 был смешанного фаготипа. 17 культур принадлежали к I фагогруппе (16,6%). 6 из них были 80-го фаготипа, нечувствительные к пенициллину, биомицину, левомицетину, стрептомицину и террамицину, 5 - 52/52А/80-го фаготипа различных антибиограмм, остальные 6 культур - различных фаготипов, относящихся к I фагогруппе.
В III фагогруппе, которая была представлена 27 культурами (26,4%), ведущее место занимали стафилококки 53-го фаготипа (8 культур) и 77-го фаготипа (8 культур). Из последних только 5 имели одинаковые антибиограммы, т. е. могли быть признаны тождественными. Как стафилококки 53-го и 77-го (5 культур) фаготипов, так и стафилококки 80-го фаготипа были устойчивы к пенициллину, биомицину, левомицетину, стрептомицину и террамицину. Остальные 11 культур были разных фаготипов III фагогруппы.
Из 53 нетипирующихся штаммов стафилококков 27 были устойчивы к пенициллину, левомицетину, биомицину, стрептомицину и террамицину. 7 штаммов, помимо этих пяти антибиотиков, были устойчивы еще и к эритромицину.
Эти данные позволяют сделать вывод об укоренении в клинике нескольких устойчивых к ряду антибиотиков штаммов патогенных стафилококков: 80, 53, 77-го фаготипов и двух нетипирующихся штаммов. Соответственно среди послеоперационных инфекционных осложнений наибольший удельный вес занимали стафилококки, принадлежащие к III фагогруппе (30 из 51-го изученного штамма). Из них было 18 штаммов 77-го фаготипа, 6 - 53-го, по три 6/47 и 6/54/75/83А фаготипов. В 3 случаях был выделен стафилококк 80-го фаготипа (I фагогруппа) и в 4 - 81-го. 15 культур не типировались международным набором фагов в 1 TP и 100 ТР. Все они были нечувствительны к пенициллину, биомицину, террамицину, левомицетину и стрептомицину. Однако следует отметить, что за 10 лет изменилась чувствительность стафилококка к антибиотикам: вначале преобладали штаммы, устойчивые к пенициллину и стрептомицину, в последние годы появились штаммы с множественной устойчивостью к антибиотикам, в том числе к тетрациклину, оксациллину и метициллину. Параллельно возросла устойчивость стафилококков к солям ртути, препаратам йода и хлора. Среди штаммов, чувствительных к антибиотикам или устойчивых лишь к пенициллину, 6 - 19% устойчиво и к солям ртути, йода и хлора, а среди устойчивых к трем и более антибиотикам - до 98%.
Все вышеизложенное дает основание считать, что основным лабораторным маркером госпитального штамма стафилококка является не столько принадлежность к фагогруппе, сколько полирезистентность к антибиотикам. Наиболее распространенным в настоящее время является экологическое объяснение приобретения устойчивости. Суть его состоит в том, что при применении какого-либо антибиотика из гетерогенной по степени чувствительности к нему популяции вследствие устранения чувствительных особей выживают и накапливаются лишь резистентные штаммы. Дальнейшее накопление их в стационаре является результатом перекрестной инфекции среди больных, которых лечат этим антибиотиком. Вслед за появлением все новых и новых антибиотиков в больницах появляются стафилококки, резистентные к каждому из них, поскольку полирезистентные штаммы имеют селективное преимущество в условиях применения антибиотиков разного спектра.
Способность такого госпитального штамма выживать в больничных условиях в течение длительного времени обеспечивается циркуляцией среди больных. Многочисленные наблюдения показали, что за каждую неделю пребывания в клинике примерно 10% больных приобретают госпитальный штамм, выделяемый во внешнюю среду длительно находящимися в больнице больными. Колонизация госпитального резистентного к антибиотикам штамма наблюдается чаще у больных, получавших соответствующие антибиотики, однако отмечается и у больных, не получавших их. Создается порочный круг - массивное обсеменение воздуха палат приводит к заражению вновь поступающих больных, а те, в свою очередь, становятся активными выделителями их во внешнюю среду.
Считается, что устойчивость к каждому антибиотику контролируется у стафилококков отдельными генетическими детерминантами, которые не передаются от штамма к штамму подобно тому, как это имеет место у энтеробактерий. Вместе с тем в лабораторных условиях выявлен такой генетический механизм передачи устойчивости от одного штамма к другому, как трансдукция, т. е. с помощью фага. Упоминавшиеся выше изменения фаготипической картины госпитальных штаммов обусловлены потерей или приобретением латентных фагов. Процесс обмена профагами в госпитальных условиях считается вполне реальным в связи с тем, что при поступлении новых больных в стационар до установления госпитального штамма у носителей стафилококки часто сосуществуют в смешанных культурах. Занесенные штаммы «изгоняются» и уступают место госпитальному штамму постепенно.
Изменение формы фагового типирования и приобретение устойчивости к антибиотикам в госпитальных условиях считаются самостоятельными процессами. Лизогенизация in vitro не изменяла резистентности штаммов к антибиотикам. Вместе с тем встречающиеся в естественных условиях лизогенизированные штаммы иногда обладают резистентностью, которой не было у родительского штамма. Наблюдались и другие фенотипические изменения в стафилококке в процессе лизогенизации, например изменения в пигментации или изменения в продукции гемолизина или стафилокиназы.
Изложенные выше материалы позволяют понять механизм формирования госпитального штамма стафилококка. Это - отобранные в госпитальных условиях из гетерогенной популяции штаммы возбудителя, характеризующиеся прежде всего полирезистентностью к антибиотикам. Параллельно происходит смена и других маркеров возбудителя, в частности его фаговой принадлежности. Однако эти материалы не дают ответа на вопрос о степени вирулентности госпитальных штаммов. Отсутствие лабораторных маркеров вирулентности затрудняет изучение проблемы. Существует мнение, что полирезистентные стафилококки более вирулентны, чем чувствительные Штаммы. Однако оно ничем не подтверждено. Штамм 80/81 проявил свою отчетливую вирулентность в тот период, когда он был резистентен лишь к пенициллину. А его полирезистентные дериваты, установившиеся позже, утратили прежнюю эпидемичность.
Вероятно, среди госпитальных штаммов стафилококков, как и любых других, имеются штаммы, значительно варьирующие по способности вызывать тяжелые поражения. Вместе с тем есть основание полагать, что в госпитальных условиях больше шансов для отбора наиболее вирулентных штаммов. Соответствующие наблюдения были получены еще в прошлом веке. А. Д. Павловский писал: «Микрококки хирургических палат до того отличаются и преобладают над бактериями других жилых помещений, что невольно останавливаешься, ищешь специальных своих, клинических условий для их появления. Клиника сама вырабатывает флегмонозные, гноекровные и рожистые микроорганизмы, которые и засоряют клинический воздух, переносясь в последний с хирургических больных, повязок, прислуги и т. д .»
В докладе комитета экспертов ВОЗ в 1967 г. записано следующее: «Одни штаммы вызывают везикулезные поражения кожи, проникая через неповрежденную кожу, другие - фурункулез, третьи способны вызывать тяжелые стафилококковые поражения при условии проникновения в ткани через рану или через дыхательные пути ». Характеристика, данная третьему типу, наиболее подходит для госпитальных штаммов.
При изучении генетики бактерий было показано, что в организме относительно резистентных лиц накапливаются менее вирулентные штаммы, а в организме восприимчивых - более вирулентные. Б. А. Чухловиным, П. Б. Остроумовым, С. П. Ивановой (1971) получены фактические материалы, которые подтверждают принципиальную возможность селекции более вирулентных штаммов стафилококка в условиях, близких к госпитальным. У добровольцев, находившихся в состоянии длительной гипокинезии (70 - 100 дней), оценивалась вирулентность выделявшихся штаммов по ряду признаков.
Из культур, выделенных в исходном состоянии испытуемых, только 35% продуцировали лецитовителлазу, 31% - коагулазу и 52% - гиалуронидазу. В период гипокинезии число ферменто-позитивных культур увеличилось соответственно до 75%, 74% и 90%. Эти различия оказались статистически достоверными (Р
Наблюдалось не только увеличение числа культур с признаками патогенности, но возрастание вирулентности стафилококков. Это отчетливо прослеживается по изменениям гиалуронидазной активности штаммов микроорганизмов, выделяемых в различные периоды наблюдения. Так, если высокие титры гиалуронидазы (1/16 - 1/256) имели не более 40% стафилококков, изолированных от испытуемых в исходном состоянии, то в период гипокинезии их количество увеличилось до 63% - 60 культур из 95 изученных (Р
Об этом же свидетельствует и изменение интенсивности выработки антиферментных противостафилококковых антител во время гипокинезии. В процессе исследования было отмечено значительное повышение в сыворотке крови людей в период гипокинезии уровня антилецитовителлазы и особенно антигиалуронидазы.
Некоторым подтверждением вышеизложенного являются и результаты клинико-бактериологических наблюдений. Проведенное нами изучение стафилококков, выделяемых на различных этапах развития послеоперационной раны, показало, что их свойства с развитием инфекционного процесса изменялись. Они продуцировали не только некротоксин, лейкоцидин, фибринолизин, но и ферменты «агрессии» - коагулазу, гиалуронидазу, лецитиназу, гемагглютинин. В клинических случаях, протекавших более тяжело, как правило, высевались более вирулентные штаммы по признакам гемолиза и плазмокоагуляции. Другие признаки патогенности стафилококков - лецитиназа, ферментация маннита, сила токсина - также были более выражены при тяжелом течении инфекционного осложнения. Однако этот вопрос нуждается в дальнейшем более тщательном изучении.
Finland (1973), сопоставив тяжесть течения стафилококковых инфекций среди стационарных больных, заразившихся до госпитализации и в госпитальных условиях, не нашел существенной разницы между ними. Однако к этим данным надо подходить с осторожностью. Из числа заболевших вне стационара в больницу попадали, несомненно, более тяжелые больные. В то же время больные госпитальной стафилококковой инфекцией учитывались все.
Есть основание считать, что формирование госпитального штамма стафилококка - лишь отражение общеэпидемиологической закономерности. Смена антигенных вариантов возбудителя и изменение его вирулентности в ходе эпидемического процесса наблюдались нами на примере стрептококковой инфекции
(В. Д. Беляков и А. П. Ходырев, 1975). К этой же категории явлений следует отнести и остающийся таинственным факт смены антигенных вариантов вируса гриппа А.
Формирование госпитальных штаммов других микроорганизмов специально не изучалось. Однако имеющиеся материалы свидетельствуют о принципиальной возможности этого явления. Изучение этиологической структуры госпитальной инфекции в разных стационарах свидетельствует о том, что на определенных этапах в той или иной клинике начинает превалировать то один, то другой вид возбудителя. Есть основание считать, что доминирующий в определенный период вид возбудителя начинает проявлять себя как госпитальный штамм, свойственный данному лечебному учреждению.
По данным Finland (1973), основная часть штаммов Klebsiella pneumoniae , выделенных от больных в 1963 - 1964 гг. принадлежала к 24-му капсулярному серотипу. Он оставался ведущим и в 1967 г. Этот штамм не выделялся от больных с клебсиелла-инфекцией, заразившихся до госпитализации.
Полученные материалы позволили квалифицировать 24-й серотип Klebsiella pneumonia как госпитальный для данного лечебного учреждения.
В одном из больничных центров Нью-Йорка большое распространение получил 25-й серотип Klebsiella (Weil, цит. по Dans с сотр., 1970).
В той же больнице в 1967 г. наблюдалось увеличение частоты выделения Serratia marcescens в качестве возбудителя госпитальной инфекции. Было выявлено 4 серотипа, имеющих наибольшее эпидемиологическое значение для этого стационара: 02:Н4, 04: H1, 011:Н4, 011: Н13. Штаммы 02:Н4 и 011:Н13 чаще выделялись из мочи и были почти исключительно связаны с инфекциями мочевых путей в урологическом отделении. Штаммы 04:H1 и 011:Н4 чаще выделялись из мокроты (Wilfert с соавт., 1970). В других трех больницах преобладали иные серотипы 04:Н4, 013:Н7 и 014:Н4 (Ewing с соавт., цит. по Wilfert с соавт., 1970). Таким образом, по-видимому, можно говорить также об определенных серотипах Serratia marcescens как госпитальных штаммах, характерных для отдельных больных. Loiseau-Morollean (1973) сообщил о серотипизации синегнойной палочки. Наиболее часто встречался штамм серо-группы 6. Однако регистрировались штаммы и других серо-групп. Эти материалы, а также косвенные эпидемиологические наблюдения свидетельствуют о возможности формирования госпитальных штаммов и этого вида возбудителя. Так, по нашим наблюдениям, пиоцианоз с определенного периода стал частым инфекционным осложнением в хирургической клинике. Pseudomonas aeruginosa выделялась от больных и из внешней среды в клинических условиях относительно продолжительное время. В Бостонской городской больнице инфекции, связанные с этим возбудителем, отмечались во всей больнице, но больше всего концентрировались в хирургических палатах. Аналогичные данные имеются и относительно инфекций, вызванных протеем.
Можно полагать, что в основе формирования госпитальных штаммов грамотрицательных бактерий лежат те же механизмы, что и при стафилококке - пассаж через организм больных и приобретение антибиотикорезистентности. Имеются и определенные особенности. Носительство этих микроорганизмов является кишечным, а не носовым. Поэтому основным фактором передачи возбудителей является не воздух, а различные предметы, подвергающиеся фекальному загрязнению. Важнейшее значение приобретают подкладные судна, белье, руки, а через них - инструменты и аппаратура. Высокая устойчивость этих микроорганизмов во влажной среде и способность их к накоплению в этих условиях создают дополнительное место резервации госпитальных штаммов.
читайте так-же