Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — серологическая реакция, позволяющая выявить антитела к известным антигенам. Метод заключается в микроскопии окрашенных мазков.

Данную реакцию используют в иммунологии, вирусологии и микробиологии. Она позволяет определить наличие вирусов, бактерий, грибов, простейших и ИКК. РИФ очень широко применяется в диагностической практике для обнаружения вирусных и бактериальных антигенов в инфекционном материале. Метод основан на способности флюорохрома вступать в связь с белками, не нарушая при этом их иммунологической специфичности. В основном применяется при диагностике инфекций мочеполовых путей.

Различают следующие методы проведения реакции иммунофлюоресценции: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод заключается в окрашивании материала флюорохромами. Благодаря способности антигенов микробов или тканей светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа, они определяются как клетки с ярко окрашенной каймой зеленного цвета.

Непрямой метод заключается в определении комплекса антиген+антитело. Для этого опытный материал обрабатывается антителами антимикробной кроличьей сыворотки, предназначенной для диагностики. После того как антитела свяжутся с микробами, их отделяют от не связавшихся и обрабатывают антикроличьей сывороткой, помеченной флюорохромом. После этого комплекс микроб+анимикробные антитела+анитикроличьи антитела определяется с помощью ультрафиолетового микроскопа также, как и при прямом методе.

Реакция иммунофлюоресценции незаменима при диагностике сифилиса. Под воздействием флюорохрома возбудитель сифилиса определяется как клетка с желто-зеленой каймой. Отсутствие свечения означает, что пациент не заражен сифилисом. Этот анализ часто назначается при положительной реакции Вассермана. Данный метод очень эффективен при диагностике, так как позволяет определить возбудителя на ранних стадиях заболевания.

Кроме того, что РИФ позволяет диагностировать сифилис, его также применяют для определения наличия таких возбудителей как хламидии, микоплазма, трихомонады, а также возбудителей гонореи и генитального герпеса.

Для проведения анализа используют мазки или венозную кровь. Процедура взятия мазка совершенно безболезненная и не представляет никакой опасности. К сдаче данного анализа необходимо подготовиться. За двенадцать часов до него не рекомендуется пользоваться средствами гигиены, такими как мало или гели. Также иногда по показаниям врача проводиться провокация. Для этого рекомендуют прием острой пищи или алкоголя или проводится инъекция провоцирующего вещества, например гоновакцина или пирогенал. Помимо этого промежуток между приемом антибактериальных препаратов и сдачей анализа должен быть не менее четырнадцати дней.

При оценке результатов следует учитывать тот факт, что свечение наблюдается не только у живых бактерий, но и у мертвых, особенно это относится к хламидиям. После курса антибиотиков мертвые клетки хламидий также обладают свечением.

При правильной подготовке пациента и соблюдении техники взятия мазка, данный анализ позволяет определить заболевания на ранних стадиях, что очень важно для своевременного лечения. Положительными сторонами данного метода является короткие сроки получения результата, простота выполнения и небольшая стоимость анализа.

К недостаткам можно отнести то, что для проведения анализа необходимо достаточно большое количество исследуемого материала. Кроме того, оценку результатов может проводить только опытный специалист.

Сифилис – одно из самых опасных венерических заболеваний, возбудителем которого является бледная трепонема. Вредоносные микроорганизмы могут проникнуть в организм после незащищенного полового акта и бытовым путем. Сегодня анализ крови на сифилис является базовым, его проводят при медицинском профосмотре, а также требуют при устройстве на работу в некоторые организации.

Кроме того, процедура в обязательном порядке назначается беременным женщинам. Самым эффективным методом диагностики этого заболевания является лабораторное исследование венозной крови. Как называется анализ на сифилис, как к нему подготовиться и насколько достоверно такое исследование?

Показания к проведению

Условно все анализы на сифилис называются ОРС. Аббревиатура расшифровывается как отборная реакция на сифилис. Под этим термином подразумевается диагностическое лабораторное исследование, в ходе которого можно обнаружить антитела к фосфолипидам, формирующиеся из-за поражения клеток и тканей, вызванного бледной трепонемой.

Проверка на сифилис чаще всего проводится людям с подозрением на наличие заболевания, а также пациентам, которым назначено полноценное медицинское обследование. При этом стоит учитывать, что исследование предполагает проведение дополнительного анализа на ВИЧ и гепатит.

И также тестирование на сифилис назначается в следующих случаях:

постановка женщины на учет при беременности;
если пациент выступает как донор;
при пребывании в местах лишения свободы;
если предыдущие анализы показали присутствие в крови пациента наркотических веществ;
длительное увеличение размера региональных лимфатических узлов;
продолжительная лихорадка неясной этиологии;
предыдущее тестирование показало присутствие бледной трепонемы;
если у человека был половой контакт с зараженным сифилисом;
возникновение сомнительной симптоматики, указывающей на развитие заболевания (первый признак сифилиса – появление высыпаний в области половых органов).

И также сдать биоматериал на исследование необходимо, если человек хочет устроиться на работу в некоторые учреждения:

воинская часть;
больницы, поликлиники, лаборатории;
кафе, рестораны, столовые и другие места общественного питания;
школы, детские садики.

Регулярное тестирование нужно проводить пациентам, у которых уже диагностировано данное заболевание. В этом случае анализ назначается для оценки эффективности выбранной схемы лечения.

Методы диагностики

Для выявления сифилиса или подтверждения его отсутствия используются разные методы диагностики и типы анализов. Наиболее информативным и точным методом исследования является изучение венозной крови пациента. Забор биоматериала может осуществляться как из вены, так и из пальца (в зависимости от типа лаборатории и методики).

В некоторых случаях обнаружение бледной трепонемы может осуществляться при помощи других образцов:

ликвор (секрет, продуцирующийся в спинномозговом канале);
содержимое лимфоузлов;
ткани изъязвлений.

Диагностика сифилиса происходит одновременно несколькими методами

Каждое из существующих тестирований отличается информативность, имеет определенные преимущества и недостатки. Решать, каким именно способом сдавать анализ на сифилис, должен только лечащий врач, учитывая индивидуальные особенности пациента.

Клинический анализ крови (РВ/RW)

Самый распространенный способ диагностирования сифилиса – проведение . Данная иммунологическая процедура называется реакцией Вассермана. Тестирование относится к классу РСК (реакция связывания комплемента) и впервые было проведено в 1906 году.

Оно базируется на способности венозной крови сворачиваться и образовывать комплекс при взаимодействии с антигенами. Современные методы РСК в выявлении сифилитической инфекции существенно отличаются от классической RW. По сути, эти процедуры имеют только одинаковое название.

Постановка диагноза осуществляется с учетом того, присутствуют ли в исследуемом образце антитела, свидетельствующие о наличии заболевания. Несмотря на то что тестирование является максимально информативным и достоверным, нельзя исключать вероятности проявления ложноположительной реакции.

Ложноположительный ответ связан с тем, что в человеческом организме изначально присутствует кардиолипин, однако обычно иммунная система не создает антитела против родного антигена. Но медицинская практика показывает, что исключения случаются. Чаще всего это происходит, если человек недавно перенес вирусное заболевание тяжелой формы или столкнулся со следующими заболеваниями:

воспаление легких;
дисфункция почек;
гематологические заболевания.

И также ложноположительная реакция нередко проявляется во время беременности, что сопровождается сильным ослаблением иммунной системы. Если специалист подозревает, что тестирование показало ложноположительный результат, пациенту назначаются дополнительные расширенные анализы.

Реакция микропреципитации (РМП)

Сегодня этот метод обнаружения сифилиса в крови постепенно вытесняет все остальные способы диагностики заболевания. Реакция микропреципитации – исследование, которое по механизму проведения схоже с реакцией Вассермана. Но в то же время процедура отличается простотой и большей информативностью – если образец заражен, в нем обязательно появятся белые хлопья.

Еще одно преимущество РМП – кровь на анализ берется не из вены, а из пальца. Если с момента заражения прошло более 30 дней, методика гарантированно покажет положительный результат. Риск получения ложноположительных сведений при таком тестировании сведен к минимуму и может проявиться только на фоне таких нарушений:

обострившиеся инфекции;
недавно перенесенный инфаркт;
кровоизлияние в мозг;
сильная интоксикация организма.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Еще один распространенный метод диагностирования сифилиса, осуществляемый при помощи венозной крови. Чтобы РИБТ дала правильный результат, за несколько дней до сдачи биоматериала необходимо исключить прием антибактериальных препаратов.

Это связано с тем, что большая часть антибиотиков при попадании в организм блокируют и подавляют деятельность бледных трепонем. Положительный ответ РИЮТ проявляется примерно с середины второй стадии заражения и может сохраняться даже после окончания лечения.

Так под микроскопом выглядит возбудитель сифилиса – бледная трепонема

РИФ и РИТ исследование

Многие пациенты сталкиваются с такой проблемой, что даже после окончания лечения сифилиса анализ показывает положительный результат. Выявить и оценить достоверную клиническую картину можно при помощи сверхчувствительных тестов РИФ (реакция иммунофлюоресценции) и РИТ (реакция иммобилизации трепонем).

Эти анализы отличаются сложностью и продолжительностью, их возможно провести только при наличии дорогостоящего современного оборудования.

РИФ анализ при сифилисе показывает положительную реакцию спустя 2 месяца после инфицирования. Если же тестирование показало отрицательный результат, значит, пациент здоров. Чаще всего РИФ и РИТ анализы делаются при положительной реакции микропреципитации для подтверждения достоверности результата.

ИФА и РПГА

К наиболее информативным и самым точным методам диагностики сифилиса относят тесты ИФА (иммуноферментный анализ) и РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Основное преимущество этих исследований – они готовятся в течение короткого периода времени.

РПГА дает положительный ответ уже через месяц после инфицирования и чаще всего проводится одновременно с нетрепонемными и трепонемными тестами. Обычно при помощи РПГА диагностируется первичная форма заболевания, сопровождающаяся возникновением язв и сыпи. Поскольку РПГА длительное время показывает положительную реакцию, методику редко применяют для оценки эффективности назначенной схемы лечения.

Иммуноферментный анализ может показать присутствие вредоносных микроорганизмов уже через 3 недели после инфицирования. Ложноположительный результат проявляется редко и чаще всего связан с системными патологиями или дисфункцией обменных процессов.

Подготовка к проведению процедуры

Провести тестирование на сифилис можно в любой лаборатории Москвы и других крупных городах. Чаще всего назначение на исследование выписывается врачом-венерологом. При желании тестирование можно провести и анонимно, без направления.

Чтобы результаты анализа были достоверными, перед процедурой необходимо придерживаться правил подготовки:

поскольку забор биоматериала осуществляется натощак, перед процедурой запрещено есть. Единственное, что допускается – пить воду;
за 3 суток до анализа рекомендуется отказаться от потребления жирной пищи и алкогольной продукции;
если пациент принимал антибиотики, анализ можно проводить только спустя неделю после окончания лечения.

Откуда берут кровь на сифилис, зависит от типа назначенной процедуры, но в большинстве случаев забор биоматериала осуществляется из вены. Время расшифровки результата зависит от типа лаборатории, обычно лаборанты предоставляют результаты уже через 1–2 дня. И также в некоторых клиниках предоставляется услуга экстренной проверки, когда результаты выдаются на руки уже через несколько часов после сдачи крови.

Стоит учитывать, что анализ на сифилис действителен на протяжении 3 месяцев, по истечении этого времени тестирование нужно проводить повторно

Расшифровка результатов

Большинство клинических лабораторий выдает бланк с результатами на руки пациенту. Полученный бланк необходимо отнести врачу, назначившему исследование, который, отталкиваясь от полученных сведений, оценит общую клиническую картину. Может ли пациент самостоятельно прочесть результаты тестирования?

Изучая описанные сведения, можно сделать только предположительный вывод, но окончательный диагноз ставится исключительно квалифицированным специалистом. При профилактическом осмотре или экспресс-диагностике чаще всего назначаются нетрепонемные тесты. Результат тестирования обозначается таким образом:

«-» – отрицательный результат;
«+», «++», «1+» «2+» – слабоположительный результат;
«+++», «++++», «3+», «4+» – положительный анализ на сифилис.

При этом стоит учитывать, что полученный результат может быть как ложноположительным, так и ложноотрицательным. Если следы сифилиса у пациента отсутствуют, и у человека не было незащищенных половых актов с новыми партнерами, врач может истолковать ложный результат как верный.

Заключение

Сифилис – опаснейшее заболевание, которое медленно и бессимптомно развивается и ведет к тяжелым осложнениям вплоть до гибели пациента. Именно поэтому проводить тестирование на присутствие заболевание время от времени рекомендуется каждому человеку. При своевременном обнаружении болезни терапия будет более эффективной и сведет к минимуму риск развития плачевных последствий.

Сифилис сопровождается многочисленными симптомами и имеет большое количество клинических форм. Его распознавание основано на комплексном клинико-лабораторном обследовании пациента. Общий анализ крови при сифилисе несет мало информации, поэтому для диагностики болезни не применяется.

Для анализов могут браться следующие материалы:

кровь из пальца и вены;
ликвор — спинно-мозговая жидкость;
отделяемое твердого шанкра (язвы);
участки регионарных лимфоузлов.

Выбор материала и метода диагностики зависит от стадии болезни. О том, какие анализы сдают на сифилис, мы поговорим в следующей рубрике.

Классификация методов лабораторной диагностики болезни

В начальной стадии можно использовать бактериоскопический метод, основанный на определении возбудителя – бледной трепонемы – под микроскопом. В дальнейшем широко используются серологические тесты, основанные на определении микробных антигенов и вырабатываемых организмом антител в биологическом материале.

Бактериологические исследование не проводят, так как возбудитель сифилиса очень плохо растет на питательных средах в искусственных условиях.

Все методы обнаружения трепонемы, то есть виды анализов на сифилис, делятся на две большие группы:

1. Прямые, которые непосредственно обнаруживают сам микроб:

темнопольная микроскопия (выявление трепонем на темном фоне);
RIT-тест – заражение исследуемым материалом кроликов;
полимеразная цепная реакция (ПЦР), обнаруживающая участки генетического материала микроорганизма.

2. Непрямые (серологические), основанные на выявлении антител к микробу, которые вырабатываются организмом в ответ на инфицирование.

Серологические анализы делятся на две группы

Нетрепонемные:

реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк);
реакция микропреципитации (РМП);
тест быстрых плазменных реагинов (RPR);
проба с толуидиновым красным.

Трепонемные:

реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСКт);
реакция иммобилизации трепонем (РИТ или РИБТ);
реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);
иммуноферментный анализ (ИФА);
иммуноблоттинг.

Методики этих анализов достаточно сложны, поэтому мы остановимся в основном на том, когда они проводятся и насколько точную информацию дают.

Сразу скажем, что основа диагностики сифилиса – серологические методы. Как называется анализ на сифилис: в каждом случае обследование может включать разные методики. Ниже мы более подробно расскажем о них.

Прямые тесты

Убедительно доказывает наличие трепонем их обнаружение под микроскопом. Вероятность сифилиса при этом достигает 97%. Вместе с тем микробы можно обнаружить лишь у 8 больных из 10, поэтому отрицательный тест не исключает заболевание.

Диагностика проводится в и периодах, когда имеются твердый шанкр или кожная сыпь. В отделяемом этих заразных элементов и ищут возбудителей болезни.

Более эффективный, но вместе с тем более дорогой и сложный анализ – обнаружение трепонем после предварительной обработки их флуоресцентными антителами. Это вещества, «прилипающие» к микробам и образующие «свечение» их в поле микроскопа.

Чувствительность методов снижается при большой длительности болезни, обработке язв и сыпи антисептиками, а также после лечения.

Биологический метод диагностики RIT высокоспецифичен, но дорог, а результат получается лишь через долгое время, когда у зараженного животного разовьется заболевание. В настоящее время метод практически не используют, хотя он практически самый точный из всех. Отличный анализ крови на сифилис для обнаружения генетического материала трепонем – ПЦР. Единственное его ограничение – относительная дороговизна диагностики.

Серологические методы

Нетрепонемные тесты

РСКк и РМП

Самый известный из этих анализов – реакция Вассермана. Это способ быстрой диагностики (экспресс анализ на сифилис), основанный на сходной реакции антител из крови больного человека на сами трепонемы и на кардиолипин, полученный из бычьего сердца. В результате такого взаимодействия антител и кардиолипина образуются хлопья.

В России данный анализ практически не используется. Его заменила реакция микропреципитации. Недостатком метода является его низкая специфичность. Ложноположительный анализ крови на сифилис встречается при туберкулезе, болезнях крови, системной красной волчанке, при беременности, после рождения ребенка, во время менструального кровотечения и во многих других случаях. Поэтому при положительной RW применяют более точные методы диагностики.

После заражения реакция становится положительной через два месяца. При вторичном сифилисе она положительна практически у всех больных.

Сходный механизм имеет реакция микропреципитации, заменившая реакцию Вассермана. Она недорога, легко исполнима, быстра в оценке, но тоже может давать ложноположительный результат. Эти два теста используют как скрининговые.

РМП становится положительной через месяц после появления твердого шанкра. Для ее проведения используется кровь из пальца.

Может ли анализ на сифилис быть ошибочным? Конечно, да, особенно при использовании нетрепонемных тестов.

Причины острых ложноположительных проб при использовании РМП:

острые инфекционные заболевания;
воспаление легких;
инфаркт миокарда;
инсульт;
травмы и отравления.

Хронические ложноположительные результаты часто возникают при следующих болезнях:

туберкулез;
бруцеллез;
лептоспироз;
саркоидоз;
ревматические болезни;
инфекционный мононуклеоз;
злокачественные опухоли;
сахарный диабет;
цирроз печени и другие.

Если возникают спорные анализы – применяют трепонемные серологические тесты для уточнения диагноза.

RPR и проба с толуидиновым красным

Тест быстрых плазменных реагинов (анализ на сифилис rpr) – еще одна разновидность реакции с кардиолипиновым антигеном. Ее используют в следующих случаях:

скрининг населения;
подозрение на сифилис;
обследование доноров.

Упомянем еще и пробу с толуидиновым красным. Все эти способы используются для оценки эффективности лечения. Они являются полуколичественными, то есть уменьшаются при выздоровлении и возрастают при рецидиве инфекции.

Отрицательные результаты нетрепонемных тестов с большой вероятностью свидетельствуют, что сифилиса у обследуемого нет. Поэтому нетрепонемные тесты применяются для оценки излеченности. Первый такой анализ следует сдать через 3 месяца после завершения курса лечения.

Трепонемные тесты

Трепонемные тесты основаны на использовании трепонемных антигенов, что значительно повышает их диагностическую ценность. Они применяются в следующих ситуациях:

положительный скрининг-тест (реакция микропреципитации);
распознавание ложноположительного результата скрининга;
подозрение на сифилис;
диагностика скрытых форм;
ретроспективная постановка диагноза, когда пациент перенес заболевание ранее.

РИТ и РИФ

Самые качественные (высокочувствительные и высокоспецифичные) – РИТ и РИФ. Недостатки этих методов – сложность, длительность, необходимость современного оборудования и обученного персонала. У большинства вылеченных пациентов трепонемные тесты остаются положительными в течение многих лет, и поэтому не могут применяться как критерий излеченности.

РИФ становится положительной через два месяца после заражения. Если она отрицательная – пациент здоров, если положительная – высока вероятность заболевания.

РИТ особенно часто применяется при положительных результатах РМП, чтобы исключить или подтвердить заболевание. Она высокочувствительна и позволяет с большой точностью сказать, есть у пациента сифилис, или нет. Однако анализ становится положительным только через три месяца после инфицирования.

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг еще более чувствителен, чем РИФ, но менее чувствителен, чем РПГА. Его используют нечасто, в основном для диагностики сифилиса новорожденных.

Перечисленные методы не подходят для скрининга, то есть быстрого выявления болезни, потому что становятся положительными позднее, чем реакция микропреципитации.

ИФА и РПГА

Современные высокоинформативные стандартизированные методы диагностики сифилиса – ИФА и РПГА. Они недороги, быстро ставятся и проверяются в больших количествах. Эти тесты могут быть применены для подтверждения диагноза.

Анализ РПГА становится положительным при первичном серопозитивном сифилисе, то есть при появлении твердого шанкра (через месяц после заражения). Особенно он ценен при диагностике поздних, и врожденных форм заболевания. Однако РПГА должна быть дополнена как минимум одним нетрепонемным и одним трепонемным тестом для точности диагностики. Такой тройной тест – самый достоверный анализ на сифилис. Недостаток РПГА – сохранение положительной реакции в течение долгого времени, что не позволяет применять тест как критерий излеченности.

Анализ ИФА на сифилис становится положительным уже через три недели после заболевания. Минусом ИФА является то, что он бывает ложный. Ложноположительная реакция возникает при системных заболеваниях, нарушениях обмена веществ, а также у детей, рожденных больными матерями.

Недостатки серологических методов привели к разработке самых совершенных способов, не дающих ошибок, но пока дорогих и редко применяемых – газовой хроматографии и масс-спектрометрии.

Алгоритм диагностики сифилитической инфекции на разных стадиях

В первичном серонегативном периоде (до 2 месяцев после заражения) проводят поиск трепонемы в темном поле или с использованием флюоресцирующих антител.

При первичном серопозитивном, вторичном и скрытом сифилисе используют РМП и ИФА, а как подтверждающий тест – РПГА.

У пациентов с рецидивами вторичного сифилиса исследуют элементы сыпи, пытаясь выделить из них трепонемы для микроскопического изучения.

В третичном периоде РМП у трети больных отрицательная. ИФА и РПГА положительные, но они могут свидетельствовать не о третичном сифилисе, а о перенесенном ранее заболевании. Слабоположительный анализ скорее говорит о выздоровлении, чем о третичном сифилисе.

При выставлении диагноза «врожденный сифилис» принимают во внимание наличие болезни у матери, разницу в показателях РМП у матери и ребенка, положительные ИФА и РПГА у новорожденного, иммуноблоттинг.

Обязательно обследуются на сифилис беременные женщины, особенно те, у которых уже были роды мертвым плодом, неразвивающаяся беременность, ранние выкидыши. Им проводится РМП, ИФА, РПГА. Обследуют на наличие заболевания и перед прерыванием беременности.

Правила получения анализа на сифилис

Чтобы получить направление в лабораторию, нужно посетить своего участкового терапевта. Если хочется сдать анализ быстрее, это можно сделать в частной лаборатории без направления (например, лаборатории Инвитро анализ на сифилис делают быстро и анонимно).

Как сдать анализ на сифилис? Кровь сдается с утра, натощак. Можно пить лишь чистую воду.

Подготовка: за два дня до сдачи анализа нужно исключить из питания жирную пищу и особенно алкоголь.

Как берут анализ? обычным способом из пальца или локтевой вены.

Сколько делается анализ на сифилис? Результат пробы обычно бывает готов уже на следующий день. Расшифровка может быть взята у врача или в лаборатории.

Сколько действителен анализ? На срок до трех месяцев.

Анализ спинно-мозговой жидкости

В некоторых случаях для диагностики нейросифилиса берут анализ ликвора.

Это обследование назначается всем пациентам со скрытым сифилисом, если у них существуют признаки патологии нервной системы, а также при скрытом и позднем нейросифилисе.

Кроме того, анализ выполняется всем пациентам после выздоровления при сохранении у них положительных серологических реакций. Мы уже писали в нашей статье, что такое явление случается нередко.

Анализ ликвора при сифилисе назначает и проводит только врач.

Спинно-мозговую жидкость получают путем прокола между двумя позвонками поясничного отдела. Ее собирают по 4 мл в две пробирки. Затем место пункции обрабатывается йодом и накрывается стерильной повязкой. После пункции пациент должен лежать на животе с приподнятым ножным концом кровати не менее 3-4 часов, затем он может лечь на бок. Постельный режим после пункции показан в течение двух суток.

Ликвор из первой пробирки исследуют с помощью общепринятых реакций на содержание белка, клеток, определение признаков менингита (воспаления мозговых оболочек).

Спинно-мозговая жидкость из второй пробирки исследуется на содержание антител к трепонеме с помощью реакции Вассермана, РМП, РИФ и РИБТ, о которых мы говорили выше.

По степени выраженности нарушений различают четыре вида изменений ликвора. Анализируя их, врач может сделать вывод о наличии разных форм поражения нервной системы (сосудистый нейросифилис, сифилитический менингит, менинго-васкулярный сифилис, спинная сухотка, поздний мезенхимальный нейросифилис), а также о выздоровлении больного с положительными серологическими тестами.

При первичном сифилисе исследуется на бледную трепонему отделяемое твердого шанкра или пунктат лимфатических узлов. При вторичном сифилисе материал берется с поверхности эрозированных папул на коже, слизистых, с трещин и др. Перед взятием материала с целью очищения от различных загрязнений поверхность очагов (эрозии, язвы, трещины) необходимо тщательно протереть стерильным ватно-марлевым тампоном, который смачивается изотоническим раствором хлорида натрия или назначить примочки с этим же раствором. Очищенную поверхность осушивают сухим тампоном и платиновой петлей или лопаточкой слегка раздражают периферические участки, одновременно слегка сдавливая пальцами в резиновой перчатке основание элемента до появления тканевой жидкости (серума), из которой готовят препарат для исследования. Получение тканевой жидкости имеет важное значение для диагностики сифилиса, так как бледные трепонемы находятся в просветах лимфатических капилляров, в тканевых щелях вокруг лимфатических и кровеносных сосудов.

Пункция регионарных лимфатических узлов

Кожу над лимфатическими узлами обрабатывают 96% спиртом и 3-5% спиртовым раствором йода. Затем 1 и 2 пальцами левой кисти фиксируют лимфатический узел. Правой рукой берут стерильный шприц с несколькими каплями изотонического раствора хлорида натрия, который вкалывается параллельно продольной оси лимфатического узла. Игла проталкивается в разных направлениях до противоположной стенки капсулы узла и содержимое шприца медленно вводится. Пальцами левой кисти лимфатический узел слегка массируется. При медленном извлечении иглы одновременно выдвигают поршень шприца, аспирируя содержимое лимфатического узла. Материал наносится на предметное стекло (при малом количестве материала добавляется капля изотонического раствора хлорида натрия), покрывается покровным стеклом. Исследование нативного препарата проводится в темном поле зрения при помощи светооптического микроскопа с темнопольным конденсором (объектив 40, 7х, 10х или 15х). Бледные трепонемы могут обнаруживаться также в окрашенных препаратах. При окраске по Романовскому-Гимзе бледные трепонемы окрашиваются в розовый цвет, по Фонтану и Морозову в коричневый (черный), по методу Бурри неокрашенные трепонемы выявляются на темном фоне.

Серологическая диагностика

Важное значение в диагностике сифилиса, оценке эффективности лечения, установлении критерия излеченности, выявления скрытых, резистентных форм придается стандартным (классическим) и специфическим серологическим реакциям. К стандартным или классическим серологическим реакциям (КСР) относятся:

Реакция Вассермана (РВ),
осадочные реакции Кана и Закса-Витебского (цитохолевая),
реакция на стекле (экспресс-метод),

к специфическим:

реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ),
реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция Вассермана (РВ)

- разработана А.Вассерманом (A.Wasserman) совместно с А.Нейссером (A.Neisser) и Ц.Бруком (C.Bruck) в 1906 году. Реакции Вассермана основана на феномене связывания комплемента (реакция Борде-Жангу) и позволяет определять противолипидные антитела (реагины). Согласно современным представлениям, в реакции Вассермана определяются антитела к липидам макроорганизма, а не бледной трепонемы и реакция выявляет аутоиммунный процесс, который вызывается денатурированием бледными трепонемами тканей макроорганизма с образованием липопротеидного комплекса (конъюгата), в котором липиды (гаптены) являются детерминантой.

Обычно РВ ставится с двумя или тремя антигенами. Наиболее часто применяется отличающийся высокой чувствительностью кардиолипиновый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трепонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь анатогенных культуральных бледных трепонем). Совместно с реагинами сыворотки крови больного эти антигены образуют иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент. Для визуального определения образованного комплекса (реагины + антиген + комплемент) в качестве индикатора применяется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент связан в 1 фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), гемолиз не наступает - эритроциты выпадают в легко заметный осадок (РВ положительная). Если в 1 фазе комплемент не связан вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, он будет использован гемолитической системой и произойдет гемолиз (РВ отрицательная). Степень выраженности гемолиза при постановке РВ оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза ++++ или 4+ (РВ резкоположительная); едва начавшийся гемолиз +++ или 3+ (РВ положительная); значительный гемолиз ++ или 2+ (РВ слабоположительная); непонятная картина гемолиза ± (РВ сомнительная); полный гемолиз - (реакция Вассермана отрицательная).

Помимо качественной оценки РВ имеется количественная постановка с различными разведениями сыворотки (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный (4+) результат. Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых клинических форм сифилитической инфекции, а также при проведении контроля за эффективностью лечения. В настоящее время реакция Вассермана ставится с двумя антигенами (кардиолипиновый и трепонемный озвученный штамм Рейтера). Как правило, РВ становится положительной на 5-6 неделе после заражения у 25-60% больных, на 7-8 неделе - у 75-96%, на 9-19 неделе - у 100%, хотя в последние годы иногда раньше или позже. При этом, титр реагинов постепенно нарастает и достигает максимальной величины (1:160-1:320 и выше) в случае появления генерализованных высыпаний (сифилис вторичный свежий). При позитивации РВ выставляется диагноз первичного серопозитивного сифилиса.
При вторичном свежем и вторичном рецидивном сифилисе РВ положительная у 100% больных, но у истощенных больных с ослабленным иммунитетом может наблюдаться отрицательный результат. Впоследствии титр реагинов постепенно понижается и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:80-1:120.
При третичном сифилисе РВ положительная у 65-70% больных и обычно наблюдается низкий титр реагинов (1:20-1:40). При поздних формах сифилиса (сифилис внутренних органов, нервной системы) положительная РВ наблюдается в 50-80% случаев. Титр реагинов колеблется от 1:5 до 1:320.
При скрытом сифилисе положительная РВ отмечается у 100% больных. Титр реагинов от 1:80 до 1:640, а при позднем скрытом сифилисе от 1:10 до 1:20. Быстрое снижение титра реагинов (вплоть до полной негативации) во время лечения свидетельствует об эффективности лечения.

Недостатки реакции Вассермана - недостаточная чувствительность (в начальной стадии первичного сифилиса отрицательная). Она негативная также у 1/3 больных, если они в прошлом лечились антибиотиками, у пациентов третичным активным сифилисом с поражениями кожи и слизистых, костно-суставного аппарата, внутренних органов, центральной нервной системы, при позднем врожденном сифилисе.
Недостаточная специфичность - реакция Вассермана может быть положительная у лиц, которые ранее не болели и не болеют сифилисом. В частности ложноположительные (неспецифические) результаты РВ отмечаются у больных, которые страдают системной красной волчанкой, лепрой, малярией, злокачественными новообразованиями, поражениями печени, обширными инфарктами миокарда и другими заболеваниями, а иногда у совершенно здоровых людей.
Кратковременная ложноположительная реакция Вассермана выявляется у некоторых женщин перед родами или после них, у лиц, злоупотребляющих наркотиками, после наркоза, приема алкоголя. Как правило, ложноположительная РВ выражена слабо, чаще с низким титром реагинов (1:5-1:20), положительная (3+) или слабо положительная (2+). При массовых серологических обследованиях частота ложноположительных результатов составляет 0,1-0,15%. Для преодоления недостаточной чувствительности, пользуются постановкой на холоде (реакция Колляра) и одновременно она ставится с другими серологическими реакциями.

Осадочные реакции Кана и Закса-Витебского

Реакция Вассермана применяется в комплексе с двумя осадочными реакциями (Кана и Закса-Витебского ), при постановке которых готовятся более концентрированные антигены. Экспресс метод (микрореакция на стекле) - относится к липидным реакциям и основан на реакции преципитации. Ставится со специфическим кардиолипиновым антигеном, 1 каплю которого смешивают с 2-3 каплями исследуемой сыворотки крови в лунках специальной стеклянной пластины.
Преимущество - быстрота получения ответа (через 30-40 мин). Результаты оцениваются по количеству выпавшего осадка и величины хлопьев. Выраженность определяют как КСР - 4+, 3+, 2+ и отрицательная. Следует отметить, что ложноположительные результаты наблюдаются чаще, чем при РВ. Как правило, экспресс-метод применяется при массовых обследованиях на сифилис, при обследовании в клинико-диагностических лабораториях, соматических отделениях и больницах. На основании результатов экспресс-метода диагноз сифилиса выставлять запрещается, исключается его применение у беременных, доноров, а также для контроля после лечения.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) - предложена в 1949 году Р.Нельсоном (R.W.Nelson) и М.Мейером (M.Mayer). Является наиболее специфичным диагностическим тестом на сифилис. Однако сложность и дороговизна постановки ограничивает ее применение. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые приводят к неподвижности бледных трепонем в присутствии комплемента. Антигеном являются живые патогенные бледные трепонемы, выделяемые от зараженных сифилисом кроликов. С помощью микроскопа проводится посчет утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем и оцениваются результаты РИБТ: иммобилизация бледных трепонем от 51 до 100% - положительная; от 31 до 50% - слабо положительная; от 21 до 30% - сомнительная; от 0 до 20% - отрицательная.
РИБТ имеет значение при дифференциальной диагностике для отграничения ложноположительных серологических реакций от реакций, обусловленных сифилисом. Поздно становится положительной чем РВ, РИФ и поэтому для диагностики заразных форм сифилиса ее не применяют , хотя во вторичном периоде сифилиса она положительная у 85-100% больных.
В третичном периоде сифилиса с поражением внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы РИБТ положительная в 98-100% случаев (РВ часто отрицательная ).
Необходимо помнить, что РИБТ может оказаться ложноположительной в случае наличия в исследуемой сыворотке трепонемоцидных препаратов (пенициллин, тетрациклин, макролиты и др.), которые вызывают неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем. С этой целью кровь на РИБТ исследуется не ранее 2 недель после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.
РИБТ как и РИФ в процессе лечения медленно негативируются, поэтому она не применяется в качестве контроля в процессе лечения.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - разработана в 1954 году A.Coons и впервые применена для диагностики сифилитической инфекции Deacon, Falcone, Harris в 1957 году. РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном для постановки являются фиксированные на предметных стеклах тканевые патогенные бледные трепонемы, на которые наносят исследуемую сыворотку. Если в исследуемой сыворотке имеются противотрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, они прочно связываются с антигеном - трепонемами, что выявляется в люминесцентном микроскопе с помощью антивидовой ("противочеловеческой") флюоресцирующей сыворотки.
Результаты РИФ учитываются по интенсивности свечения бледных трепонем в препарате (желто-зеленое свечение). При отсутствии противотрепонемных антител в сыворотке, бледные трепонемы не определяются. При наличии антител выявляется свечение бледных трепонем, степень которого выражается в плюсах: 0 и 1+ - отрицательная реакция; от 2+ до 4+ - положительная.
РИФ относится к групповым трепонемным реакциям и ставится в разведении исследуемой сыворотки в 10 и 200 раз (РИФ-10 и РИФ-200). РИФ-10 считается более чувствительной, однако часто выпадают неспецифические положительные результаты, чем при постановке РИФ-200 (отличается более высокой специфичностью). Как правило, РИФ становится положительной раньше, чем РВ - положительная при первичном серонегативном сифилисе у 80% больных, у 100% во вторичном периоде сифилиса, всегда положительная при скрытом сифилисе и в 95-100% случаев при поздних формах и врожденном сифилисе.
Специфичность РИФ повышается после предварительной обработки исследуемой сыворотки сорбентом-ультраозвученным трепонемным антигеном, который связывает групповые антитела (РИФ - абс).
Показания к постановке РИБТ и РИФ - диагностика скрытого сифилиса для подтверждения специфичности комплекса липидных реакций в случае предположения сифилитической инфекции на основании положительной РВ. Положительные РИБТ и РИФ являются доказательством латентного сифилиса. При ложноположительной РВ при различных болезнях (системная красная волчанка, злокачественные новообразования и др.) и если повторные результаты РИБТ и РИФ отрицательные, это свидетельствует о неспецифическом характере РВ. Подозрение на поздние сифилитические поражения внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы при наличии у больных отрицательной РВ. Подозрение на первичный серонегативный сифилис, когда у пациентов при многократных исследованиях отделяемого с поверхности эрозии (язвы), при пунктате из увеличенных регионарных лимфатических узлов бледная трепонема не обнаруживается - в этом случае ставится только РИФ - 10.
При обследовании лиц с отрицательной РВ , которые имели длительные половые и бытовые контакты с больными сифилисом, учитывая вероятную возможность лечения их в недавнем прошлом противосифилитическими препаратами, вызвавшими негативацию РВ. Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA - enzymelinked immunosorbent assay) - метод разработан E.Engvall и соавт., S.Avrames (1971). Сущность состоит в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя с антителом исследуемой сыворотки крови и выявлении специфического комплекса антиген-антитело при помощи меченной ферментом антивидовой иммунной сыворотки крови. Это позволяет оценивать результаты ИФА визуально по степени изменения окраски субстрата под действием фермента, входящего в состав конъюгата. Недостоверные результаты ИФА могут возникать в результате недостаточного разведения инградиентов, нарушения температурного и временного режимов, несоответствии рН растворов, загрязнении лабораторной посуды, неправильной технике промывки носителя.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Предложена в качестве диагностического теста на сифилис T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). Макромодификация реакции называется ТРНА, микромодификация - МНА-ТР, автоматизированный вариант - AMNA-TR, реакция с макрокапсулами из полимочевины вместо эритроцитов - МСА-ТР. Чувствительность и специфичность РПГА аналогичны РИБТ, РИФ, но РПГА имеет меньшую чувствительность при ранних формах сифилиса по сравнению с РИФ-абс и большую при поздних, при врожденном сифилисе. РПГА ставится в качественном и количественном вариантах.

Техника взятия крови для серологических реакций

Для исследования на РВ, РИФ, РИБТ кровь берут из локтевой вены натощак или не раньше 4 час после приема пищи стерильным шприцом или одной иглой (самотеком). В месте взятия кожу предварительно обрабатывают 70% спиртом. Шприц и игла должны быть промыты изотоническим раствором хлорида натрия. В чистую сухую холодную пробирку вливают 5-7 мл исследуемой крови. На пробирку клеится чистая бумага с фамилией, инициалами пациента, номером истории болезни или амбулаторной карты, датой взятия крови. После взятия крови пробирка помещается в холодильник с температурным режимом +4°+8°С до следующего дня. На следующий день сыворотка сливается для исследования. В случае не использования крови на следующий день, сыворотку необходимо слить со сгустка и хранить в холодильнике не более 1 недели. Для исследования на РИБТ пробирка должна быть специально подготовлена и стерильна. В случае нарушения правил забора крови на исследование, несоблюдение условий может произойти искажение результатов.
Не рекомендуется производить забор крови для исследования после приема пищи, алкоголя, различных медикаментозных препаратов, после введения различных вакцин, во время менструального цикла у женщин.
Для исследования на экспресс-метод кровь берегся из кончика пальца, как это делается при ее взятии на СОЭ, но берут кровь на 1 капилляр больше. Экспресс-метод можно также ставить с сывороткой крови, полученной при помощи венопункции. Если возникает необходимость исследования крови в отдаленных лабораториях, вместо крови можно пересылать сухую сыворотку (метод сухой капли). Для этого на следующий день после взятия крови, сыворотку отделяют от сгустка и набирают в стерильный шприц в количестве 1 мл. Затем сыворотку выливают в виде 2 отдельных кружков на полоску плотной писчей бумаги (вощаная бумага или целлофан) размером 6x8 см. На свободном крае бумаги пишется фамилия, инициалы обследуемого и дата забора крови. Бумагу с сывороткой защищают от прямых солнечных лучей и оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Сыворотка засыхает в виде небольших кружочков блестящей желтоватой стекловидной пленки. После этого, полоски бумаги с высушенной сывороткой свертывают как аптечный порошок и отсылают в лабораторию, указывая диагноз и с какой целью исследуется.

Серологическая резистентность

У части (2% и более) больных сифилисом, несмотря на проведенную полноценную противосифилитическую терапию, наблюдается замедление (отсутствие) негативации серологических реакций после окончания лечения до 12 мес и более. Возникает так называемая серологическая резистентность, которая в последние годы стала часто наблюдаться. Различают формы серологической резистентности:

Истинная (абсолютная, безусловная) - необходимо провести дополнительное противосифилитическое лечение, комбинируя с неспецифической терапией для повышения иммунных сил организма.
Относительная - после полноценного лечения бледные трепонемы образуют цист- или L-формы, которые находятся в организме в маловирулентном состоянии и вследствие этого дополнительное лечение не изменяет показатели серологических реакций, особенно РИФ и РИБТ.

В то же время в цист-формах происходят незначительные обменные процессы, а оболочки цист-форм являются чужеродным белком (антигеном). Для своей защиты организм вырабатывает специфические антнтела, которые положительны или резко положительны при постановке серологических реакций, отсутствии проявлений заболевания. При L-формах обменные процессы более снижены и антигенные свойства отсутствуют или незначительно выражены. Специфические антитела не вырабатываются или они в небольшом количестве, серологические реакции слабо положительные или отрицательные. Чем больший период времени от момента заражения, тем большее количество бледных трепонем трансформируется в формы выживания (цисты, споры, L-формы, зерна), при которых противосифилитическая терапия не эффективна.

Псевдорезистентность - после проведенного лечения несмотря на положительные серологические реакции бледная трепонема в организме отсутствует. Антигена в организме нет, но продолжается выработка антител, которые фиксируются при постановке серологических реакций.
Серологическая резистентность может развиваться вследствие:

неполноценного лечения без учета давности и стадии заболевания;
недостаточной дозы и в частности из-за неучета массы тела пациентов;
нарушения интервала между введением препаратов;
сохранения в организме бледных трепонем несмотря на проведенное полноценное специфическое лечение, из-за их стойкости к пенициллину и другим химиопрепаратам в случае наличия скрытых, осумкованных очагов поражения во внутренних органах, нервной системе, лимфатических узлах, которые малодоступны для антибактериальных препаратов (нередко бледные трепонемы обнаруживаются в тканях рубца через много лет после окончания терапии, в лимфатических узлах иногда удается обнаружить бледные трепонемы через 3-5 лет после противосифилитической терапии);
снижения защитных сил при различных заболеваниях и интоксикациях (эндокринопатии, алкоголизм, наркомания и др.);
общего истощения (приемом пищи бедной витаминами, белками, жирами).

Кроме этого, нередко выявляется ложная позитивация серологических реакций, не связанная с наличие у больных сифилиса и вызванная:

сопутствующими неспецифическими заболеваниями внутренних органов, нарушениями сердечнососудистой системы, ревматизмом, дисфункциями эндокринной и нервной систем, тяжелыми хроническими дерматозами, злокачественными новообразованиями;
поражениями нервной системы (тяжелые травмы, сотрясение головного мозга, психические травмы);
беременностью; хроническими интоксикациями алкоголем, никотином наркотиками; инфекционными болезнями (малярия, туберкулез, вирусный гепатит, дизентерия, сыпной, брюшной и возвратный тифы).

Указанные факторы могут оказывать влияние на иммунологическую реактивность организма как в период активного развития сифилитических проявлений, так и во время их регресса.

РИФ, РИБТ, РПГА

РИФ - реакция иммунофлюоресценции - трепонемный тест. Является одним из самых чувствительных анализов на сифилис. РИФ становится положительной через 10-20 дней после инфицирования, что относит ее к методам раннего выявления сифилиса.

Показания проведения РИФ:

Постановка РИФ проводится у лиц с симптомами сифилиса, при этом отрицательными реакциями - РМП, РВ;
в качестве дифференциальной реакции у лиц с положительными реакциями RW, микрореакции и отсутствием симптомов;
у беременных при отсутствии клинических проявлений и сифилиса в анамнезе.

Методика проведения РИФ:

При проведении реакции в сыворотку пациента добавляется кровь кролика, зараженная бледной трепонемой(возбудитель сифилиса) и флюоресцирующая(светящаяся) сыворотка. Исследование заключается в наблюдении свечения комплексов под люминесцентным микроскопом. Результаты реакции интерпретируются в зависимости от интенсивности свечения от 1+ до 4+, что указывает на наличие сифилиса. Отсутствие свечения - отрицательный результат РИФ обозначает, что обследуемый здоров. Ложные результаты анализа встречаются крайне редко при системных процессах, беременности и т.д.
Реакция ставится в модификации РИФ-200 и РИФ-авс(абсорбция).
Чувствительность реакции при первичном сифилисе составляет порядка 85%
при вторичном сифилисе - 100%
при третичном сифилисе - 98-100% .

Негативация РИФ происходит в течение нескольких лет после лечения сифилиса. После проведенной противосифилитической терапии необходимо наблюдение за показателями в динамике.

РИБТ - реакция иммобилизации бледных трепонем - является самым специфичным анализом крови на сифилис. РИБТ высококачественный, дорогостоящий анализ крови, выполнение которого могут позволить себе хорошо оснащенные лабораторные комплексы. РИБТ является основополагающей реакцией при скрытых формах сифилиса, нейросифилисе, висцеросифилисе. Позволяет отдифференцировать ложноположительные реакции от истинного заболевания сифилисом.

Постановка реакции основана на обездвиживании (иммобилизации) возбудителя сифилиса видоспецифичными антителами. Путем микроскопического исследования читается результат реакции: 0-20% - отрицательная, 21-30%- сомнительная, 31-50% - слабоположительная, 51-100% - положительная реакция. То есть к положительным результатам на сифилис относятся те, где РИБТ более 50%. При сифилисе РИБТ становится положительной достаточно медленно: в первичный периоде сифилиса она еще отрицательна, во вторичном свежем периоде - положительна в 50% случаев, во вторичном рецидивном периоде - положительна в 90-100%, в третичном периоде - положительна в 99-100%.

Негативация РИБТ осуществляется десятилетиями, поэтому как критерий достоверности излеченности ее использовать неправомочно, тем не менее динамическое наблюдение после проведенного противосифилитического лечения необходимо.

Проведение реакции РИБТ целесообразно не ранее чем через 30 дней после окончания лечения. РПГА - реакция пассивной гемагглютинации - относится к трепонемным тестам, проводится в комплексе с нетрепонемными. Используется для подтверждения диагноза сифилиса на любой его стадии.

Реакцию целесообразно проводить через 4 недели после предполагаемого заражения. При проведении реакции к сыворотке крови пациента добавляют препарат, приготовленный из эритроцитов животного происхождения, сенсибилизированных антигеном бледной трепонемы - возбудителя сифилиса.

Суть реакции РПГА заключается в склеивании (агглютинации) в присутствии антител к трепонеме и образовании агглютината - фигуры, которую наблюдает врач - лаборант. Реакция оценивается по количеству +: 4+- резкоположительный результат, 3+-положительный, 2+-слабоположительный, 1+-сомнительный, - - отрицательный результат. При положительном результате реакции проводится количественная оценка с определением концентрации (титра) антител. При прогрессировании сифилиса - титр антител постоянно растет.

РПГА остается положительной в течение десятилетий после лечения сифилиса, поэтому не может использоваться в качестве критерия достоверности излеченности. Однако необходимо наблюдать титр антител РПГА в динамике.

Метод обладает высокой чувствительностью. Результаты РПГА могут быть ложноположительны. К таким результатам анализа могут приводить болезни соединительной ткани, некоторые инфекции, и т.д.